【摘 要】
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建立和验证人孕烷X受体(human pregnane X receptor,hPXR)拮抗剂体外筛选体系,并在转录水平和蛋白水平研究白藜芦醇通过拮抗hPXR对CYP3A4和MDR1 (P-gp)表达的影响.本研究用双荧光素酶报告基因系统检测共转染PXR表达质粒和CYP3A4报告质粒的LS174T细胞,在给予PXR配体利福平的同时分别给予不同浓度的白藜芦醇(RES),检测24 h后的荧光素酶活性；应
【机 构】
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中山大学药学院 药物代谢与药动学实验室,广东 广州 510006
【出 处】
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第十届全国药物和化学异物代谢学术会议暨第三届国际ISSX/CSSX联合学术会议
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建立和验证人孕烷X受体(human pregnane X receptor,hPXR)拮抗剂体外筛选体系,并在转录水平和蛋白水平研究白藜芦醇通过拮抗hPXR对CYP3A4和MDR1 (P-gp)表达的影响.本研究用双荧光素酶报告基因系统检测共转染PXR表达质粒和CYP3A4报告质粒的LS174T细胞,在给予PXR配体利福平的同时分别给予不同浓度的白藜芦醇(RES),检测24 h后的荧光素酶活性；应用Real-Time定量PCR和Western Blot检测其mRNA水平和蛋白水平.结果显示,通过双荧光素酶报告基因检测系统,筛选出白藜芦醇在25 μM和50μM时可通过拮抗PXR将利福平对CYP3A4的诱导作用由4.37倍分别降至1.54倍和0.25倍,且具有统计学差异(P＜0.01).在过表达hPXR的LS174T细胞中,Real-Time PCR结果显示50μM白藜芦醇可将利福平诱导的CYP3A4和MDRl mRNA分别由14.05倍和1.8倍降至7.88倍和1.3倍(P＜0.05).此外,Western Blot结果表明白藜芦醇可降低利福平诱导的CYP3A4及P-gp (MDR1)蛋白表达.本研究发现白藜芦醇可通过拮抗PXR配体激活作用而影响PXR下游靶基因CYP3A4及MDR1的表达.
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