【摘 要】
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目的:制备抗鸡γ-干扰素单克隆抗体(mAb).方法:应用淋巴细胞杂交瘤技术,以重组菌BL21(DE3)(pET-ChlFN-γ)表达产物的包涵体作为抗原免疫BALB/c鼠,以纯化的GST-ChlFN-γ作为检测抗原,制备抗鸡γ-干扰素mAb;采用ELISA、Dot-ELISA和Westernblot鉴定mAb的特异性.结果:获得2株可稳定分泌抗鸡γ-干扰素mAb的杂交瘤细胞株1G5、5E3,其Ig
【机 构】
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扬州大学,江苏,扬州,225009
【出 处】
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中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会第六届全国会员代表大会暨第11次学术研讨会
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目的:制备抗鸡γ-干扰素单克隆抗体(mAb).
方法:应用淋巴细胞杂交瘤技术,以重组菌BL21(DE3)(pET-ChlFN-γ)表达产物的包涵体作为抗原免疫BALB/c鼠,以纯化的GST-ChlFN-γ作为检测抗原,制备抗鸡γ-干扰素mAb;采用ELISA、Dot-ELISA和Westernblot鉴定mAb的特异性.
结果:获得2株可稳定分泌抗鸡γ-干扰素mAb的杂交瘤细胞株1G5、5E3,其Ig亚类均为IgG2a.其腹水mAb的ELISA效价依次为1.6×10-6,1.2×10-5.在Dot-ELISA试验中,这2株mAb均只与表达His-ChlFN-γ及GST-ChlFN-γ的重组大肠杆菌反应,与未表达这2种IFN-γ的其他8种菌株均不发生反应.在蛋白质转印试验中,两株mAb均能与融合蛋白GST-ChlFN-γ、His-ChlFN-γ发生反应,出现特-异性条带.结果表明,mAbIG5、5E3是针对鸡γ-干扰素的特异性mAb.
结论:成功地制备抗鸡γ-干扰素的mAb,它们在免疫检测、免疫细胞功能分析和免疫调节研究等方面有应用价值。
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