论文部分内容阅读
[摘 要]目的：针对小儿氨酚黄那敏颗粒中的对乙酰胺基酚的含量应用高效液相色谱法进行测定实施分析。方法：采用EclipseXDB-C18（4.6mm×150mm，5um）色谱柱，以甲醇-水（40：60）为流动相，流速1.0ml·min-1，检测波长275nm，进样量为20ul。结果：对乙酸氨基酚在5.84-58.4ml·min-1（r=0.9998）内线性良好，平均回收率为116.6%，RSD=1.46%。结论该法简便快速、重复性好，可用于该制剂的质量控制。
[关键词]小儿氨酚黄那敏颗粒；对乙酸氨基酚；高效液相色谱法
中图分类号：U164 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2016）10-0335-01
小儿氨酚黄那敏颗粒是一种适用于缓解儿童普通感冒及流行性感冒引起的发热、头痛、四肢酸痛、打喷嚏、流鼻涕、鼻塞、咽痛等症状常用的复方制剂，由对乙酸氨基酚、马来酸氯苯那敏、人工牛黄等组成，是临床常用的小儿抗感冒药。
现行标准中仅采用紫外分光光度法测定对乙酸氨基酚的含量，专属性不强，结果重现性差，因此产品质量可控性差。我们在文献工作的基础上，建立了一种快速检测小儿感冒药中对乙酸氨基酚含量的高效液相色谱法，并取得满意效果。
1、仪器与试药
Agilent1200型高效液相色谱仪、61328B一级管阵列检测器，关国安捷伦公司；KQ5200E型超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；DZF}型电热恒温鼓风干燥箱，上海一恒科学
仪器有限公司；ME254S电子天平，德国Sartorius公司；UV-2550紫外分光光度计，日本岛津公司。
对乙酸氨基酚对照品（中国药品生物制品检定所，批号为100018200408）；甲醇（色谱纯，Methane、公司，美国），娃哈哈纯水。小儿氨酚黄那敏颗粒均购自不同厂家（产品批号分别为：1001321，100607，100885；其中每袋含对乙酸氨基酚125mg，马来酸氯苯那敏0.5mg，人工牛黄5mg）。
2、方法与结果
2.1 确定色谱的应用条件
选择C18色谱柱进行实验，该色谱柱为150×4.6mm，波长为5um，而实验选择的流动相则为甲醇：水，两者的配比为40：60，流动相的流速控制为1.0ml·min-1，选用的进样量需要设定为20ul，确保色谱柱的温度保持在25℃点上，并且将检测波长的峰值设定为275nm，选用相应的对照品，将其与样品的色谱柱图进行对比分析，详情可见图1。
2.2 制备对照品溶液
选用精确的称量仪器进行对乙酰氨基酚对照品的称取，对照品的温度要控制为105℃，将其进行干燥处理后达到恒重的状态，确保其重量为0.0146g，将其放置选用的容量瓶中，该容量瓶为50ml，然后在容量瓶中加入适量的水进行稀释，充分摇匀后，将其作为对照品溶液备用。
2.3 制备样品溶液
从五个不同的生产厂家各选择一袋小儿氨酚黄那敏颗粒，将这五袋小儿氨酚黄那敏颗粒进行混合磨碎，然后精确的称取出一袋的药品粉末重量，将粉末放置到准备好的容量瓶中，该容量瓶为100ml，加入适量的水，使得药品粉末可以稀释到制定的浓度刻度，摇匀，并利用微孔滤膜进行过滤处理，将过滤后的溶液留用。
2.4 测定线性关系
针对制备的对照品溶液进行称量，分别称出1-5ml的溶液，分别将称取出的溶液，加入五个容量为50ml的容量瓶中，并利用水进行定容处理，在完成定容处理后，容量瓶中溶液的溶度分别为5.84mg·L-1，17.52mg·L-1，29.2mg·L-1，40.88mg·L-1，58.4mg·L-1，而且将进样量也设定为标准溶液量，标准溶液量为20ul，然后就可以总结得出色谱的流出曲线图。将对乙酰胺基酚的浓度作为X轴，其浓度单位设定为mg·L-1，而Y轴则设定为峰面积，进行线性回归方程的计算，计算结果为Y=20.96X+0.8787，r=0.9998。从计算的结果就可以看出，对乙酰氨基酚的浓度范围以及峰面积之间在对乙酰氨基酚的浓度达到5.84mg·L-1以上，58.4mg·L-1以下的时候，呈现出线性关系。
2.5 测定精密度
严格的依据相应的方法进行对照品溶液的选取，分别选取6次，而且选取的对照品溶液溶度需要控制为58.4mg·L-1，每一次选用的值均为20ul，通过实验计算可知，RSD=1.19%（n=6），这就表明所选用的仪器有着较高的精度值。
2.6 重复性试验
分别取制备样品溶液项下3种药品供试液按制备对照品溶液项下的色谱条件重复进样3次，分别测得各种药品供试液中对乙酸氨基酚色谱峰峰而积的RSD值，结果分别为0.29%，0.17%，0.73%（n=3），表明本法重复性好。
2.7 稳定性测定
分别取制备样品溶液项下3种药品供试液，在时间0，1，2，3，4，5h按2.2项下的色谱条件进样，记录峰面积，分别计算其RSD值。结果分别为2.68%，0.86%，0.89%（n=6），表明样品在5h内稳定。
2.8 加标回收率测定
取同一批（批号：1001321，4g/袋）已知含量的小儿氨酚黄那敏颗粒样品5份，每份约0.800g，分别精密加入对乙酸氨基酚2.500mg，依法测定，对乙酸氨基酚总平均回收率为116.6%，RSD为1.46%（表1）。
2.9 样品测定
取制备样品溶液项下处理好的样品溶液各20ul，按上述色谱条件进行测定，按外标法（峰而积）计算含量，结果3批样品1001321，100607，100885的含量分别为：83.2%，84.1%，84.5%（标示量）。
3、讨论
3.1 选择适宜的溶液
就相关的文献资料可以了解到，流动相作为溶剂溶解样品经常被应用于实验研究。通过本文的研究可以了解到，将水作为对照品，分别针对水和流动相进行溶剂溶解检定，对比的结果就是两者之间没有明显的不同。所以，可以选择价格较低的纯净水作为溶剂溶解样品进行应用。
3.2 选择适宜的流动相
就相关的文献资料表明，在利用高效液相色谱法进行实验的过程中，应用的流动相多选择甲醇：磷酸二氢钾溶液：三乙胺溶液，或者是选用的甲醇：乙腈：磷酸溶液。而就本文的实验研究来说，选择的溶液则为甲醇：水，兩者的比例为40：60，这样的溶液在实验中进行应用，具有操作便利的特点，而且也很容易出峰，并且在分离度上也相对较高，出现的峰形具有一定的对称性，而且在实验完成后，也很容易对色谱柱实施清洗。
3.3 合理的选用适宜的测定波长
测定对乙酰胺基酚紫外吸收波长后，根据测定的结果可以了解到，样品溶液的峰值在275nm的时候，吸收率表现为最大。所以，本文在展开实验的时候，选用的检测波长峰值为275nm，就依据该检测波长所检测到的结果表明，基线处于较为稳定的状态，不会对对乙酰氨基酚中的杂质造成严重的影响。
参考文献
[1] 田磊.HPLC法同时测定复方银翘氨敏胶囊中维生素C及对乙酰氨基酚的含量[J].安徽医药.2010（09）.
[2] 冀爱芬，裴小勇，王红燕，华丽云，张勇.HPLC法测定复方对乙酰氨基酚片中三种成分的含量[J].中国药师.2010（08）.
[3] 韩正洲，吴曙光，李琼娅，王静.HPLC测定感冒灵颗粒中对乙酰氨基酚、咖啡因和马来酸氯苯那敏的含量[J].中国药学杂志.2010（03）.
[4] 庄幼龄.HPLC法同时测定感冒灵颗粒中对乙酰氨基酚和咖啡因含量[J].海峡药学.2009（12）.
[关键词]小儿氨酚黄那敏颗粒；对乙酸氨基酚；高效液相色谱法
中图分类号：U164 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2016）10-0335-01
小儿氨酚黄那敏颗粒是一种适用于缓解儿童普通感冒及流行性感冒引起的发热、头痛、四肢酸痛、打喷嚏、流鼻涕、鼻塞、咽痛等症状常用的复方制剂，由对乙酸氨基酚、马来酸氯苯那敏、人工牛黄等组成，是临床常用的小儿抗感冒药。
现行标准中仅采用紫外分光光度法测定对乙酸氨基酚的含量，专属性不强，结果重现性差，因此产品质量可控性差。我们在文献工作的基础上，建立了一种快速检测小儿感冒药中对乙酸氨基酚含量的高效液相色谱法，并取得满意效果。
1、仪器与试药
Agilent1200型高效液相色谱仪、61328B一级管阵列检测器，关国安捷伦公司；KQ5200E型超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；DZF}型电热恒温鼓风干燥箱，上海一恒科学
仪器有限公司；ME254S电子天平，德国Sartorius公司；UV-2550紫外分光光度计，日本岛津公司。
对乙酸氨基酚对照品（中国药品生物制品检定所，批号为100018200408）；甲醇（色谱纯，Methane、公司，美国），娃哈哈纯水。小儿氨酚黄那敏颗粒均购自不同厂家（产品批号分别为：1001321，100607，100885；其中每袋含对乙酸氨基酚125mg，马来酸氯苯那敏0.5mg，人工牛黄5mg）。
2、方法与结果
2.1 确定色谱的应用条件
选择C18色谱柱进行实验，该色谱柱为150×4.6mm，波长为5um，而实验选择的流动相则为甲醇：水，两者的配比为40：60，流动相的流速控制为1.0ml·min-1，选用的进样量需要设定为20ul，确保色谱柱的温度保持在25℃点上，并且将检测波长的峰值设定为275nm，选用相应的对照品，将其与样品的色谱柱图进行对比分析，详情可见图1。
2.2 制备对照品溶液
选用精确的称量仪器进行对乙酰氨基酚对照品的称取，对照品的温度要控制为105℃，将其进行干燥处理后达到恒重的状态，确保其重量为0.0146g，将其放置选用的容量瓶中，该容量瓶为50ml，然后在容量瓶中加入适量的水进行稀释，充分摇匀后，将其作为对照品溶液备用。
2.3 制备样品溶液
从五个不同的生产厂家各选择一袋小儿氨酚黄那敏颗粒，将这五袋小儿氨酚黄那敏颗粒进行混合磨碎，然后精确的称取出一袋的药品粉末重量，将粉末放置到准备好的容量瓶中，该容量瓶为100ml，加入适量的水，使得药品粉末可以稀释到制定的浓度刻度，摇匀，并利用微孔滤膜进行过滤处理，将过滤后的溶液留用。
2.4 测定线性关系
针对制备的对照品溶液进行称量，分别称出1-5ml的溶液，分别将称取出的溶液，加入五个容量为50ml的容量瓶中，并利用水进行定容处理，在完成定容处理后，容量瓶中溶液的溶度分别为5.84mg·L-1，17.52mg·L-1，29.2mg·L-1，40.88mg·L-1，58.4mg·L-1，而且将进样量也设定为标准溶液量，标准溶液量为20ul，然后就可以总结得出色谱的流出曲线图。将对乙酰胺基酚的浓度作为X轴，其浓度单位设定为mg·L-1，而Y轴则设定为峰面积，进行线性回归方程的计算，计算结果为Y=20.96X+0.8787，r=0.9998。从计算的结果就可以看出，对乙酰氨基酚的浓度范围以及峰面积之间在对乙酰氨基酚的浓度达到5.84mg·L-1以上，58.4mg·L-1以下的时候，呈现出线性关系。
2.5 测定精密度
严格的依据相应的方法进行对照品溶液的选取，分别选取6次，而且选取的对照品溶液溶度需要控制为58.4mg·L-1，每一次选用的值均为20ul，通过实验计算可知，RSD=1.19%（n=6），这就表明所选用的仪器有着较高的精度值。
2.6 重复性试验
分别取制备样品溶液项下3种药品供试液按制备对照品溶液项下的色谱条件重复进样3次，分别测得各种药品供试液中对乙酸氨基酚色谱峰峰而积的RSD值，结果分别为0.29%，0.17%，0.73%（n=3），表明本法重复性好。
2.7 稳定性测定
分别取制备样品溶液项下3种药品供试液，在时间0，1，2，3，4，5h按2.2项下的色谱条件进样，记录峰面积，分别计算其RSD值。结果分别为2.68%，0.86%，0.89%（n=6），表明样品在5h内稳定。
2.8 加标回收率测定
取同一批（批号：1001321，4g/袋）已知含量的小儿氨酚黄那敏颗粒样品5份，每份约0.800g，分别精密加入对乙酸氨基酚2.500mg，依法测定，对乙酸氨基酚总平均回收率为116.6%，RSD为1.46%（表1）。
2.9 样品测定
取制备样品溶液项下处理好的样品溶液各20ul，按上述色谱条件进行测定，按外标法（峰而积）计算含量，结果3批样品1001321，100607，100885的含量分别为：83.2%，84.1%，84.5%（标示量）。
3、讨论
3.1 选择适宜的溶液
就相关的文献资料可以了解到，流动相作为溶剂溶解样品经常被应用于实验研究。通过本文的研究可以了解到，将水作为对照品，分别针对水和流动相进行溶剂溶解检定，对比的结果就是两者之间没有明显的不同。所以，可以选择价格较低的纯净水作为溶剂溶解样品进行应用。
3.2 选择适宜的流动相
就相关的文献资料表明，在利用高效液相色谱法进行实验的过程中，应用的流动相多选择甲醇：磷酸二氢钾溶液：三乙胺溶液，或者是选用的甲醇：乙腈：磷酸溶液。而就本文的实验研究来说，选择的溶液则为甲醇：水，兩者的比例为40：60，这样的溶液在实验中进行应用，具有操作便利的特点，而且也很容易出峰，并且在分离度上也相对较高，出现的峰形具有一定的对称性，而且在实验完成后，也很容易对色谱柱实施清洗。
3.3 合理的选用适宜的测定波长
测定对乙酰胺基酚紫外吸收波长后，根据测定的结果可以了解到，样品溶液的峰值在275nm的时候，吸收率表现为最大。所以，本文在展开实验的时候，选用的检测波长峰值为275nm，就依据该检测波长所检测到的结果表明，基线处于较为稳定的状态，不会对对乙酰氨基酚中的杂质造成严重的影响。
参考文献
[1] 田磊.HPLC法同时测定复方银翘氨敏胶囊中维生素C及对乙酰氨基酚的含量[J].安徽医药.2010（09）.
[2] 冀爱芬，裴小勇，王红燕，华丽云，张勇.HPLC法测定复方对乙酰氨基酚片中三种成分的含量[J].中国药师.2010（08）.
[3] 韩正洲，吴曙光，李琼娅，王静.HPLC测定感冒灵颗粒中对乙酰氨基酚、咖啡因和马来酸氯苯那敏的含量[J].中国药学杂志.2010（03）.
[4] 庄幼龄.HPLC法同时测定感冒灵颗粒中对乙酰氨基酚和咖啡因含量[J].海峡药学.2009（12）.