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[摘 要]对延胡索总生物碱提取的最佳工艺进行对比分析和筛选。方法：在提取的过程中，要严格得根据正交实验表来进行提取操作，在这一过程中我们可以充分的利用生物碱比较容易溶解在酸水当中而难溶于碱水当中的特征来完成提取物纯化工作，同时在这一过程中我们还要采用紫外线分光光度法对总生物碱的含量进行全面的测定，将延胡索总生物碱含量和干膏率当作是检测的指标，同时还要在这一过程中确定最为科学合理的提取工艺。结果：最为科学的提取工艺是8倍浓度为60%的乙醇溶液，提取3次，时间间隔为2h。结论：这一功率提取率非常高，同时具有非常强的稳定性，这样一来也为更加深度的去研究延胡索总生物碱的药理作用提供了非常好的条件。
[关键词]延胡索；生物碱；干膏率；正交试验
中图分类号：U220 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2016）10-0357-01
延胡索是某种罂粟科植物的干燥根茎，它最为主要的化学成分就是生物碱，它能够起到非常好的活血化瘀的作用，同时也能起到行气止痛的作用，可以有非常好的补气养血的功能，此外，在止痛效果上也有着非常好的表现，除此之外，这种药物在预防和治疗胃溃疡、镇静、催眠以及抗肿瘤等方面都有着非常广泛的应用。在本实验当中主要是借助生物碱易溶于酸而难溶于碱的特性来对提取物进行纯化处理，将总生物碱的含量和干膏率当作最为重要的指标，同时还要在这一过程中采用正交试验设计法来对提取工艺进行有效的控制和处理，这样也能够促进延胡索总生物碱药理作用的深入研究。
1、仪器与材料
752型紫外可见分光光度计（上海菁华科技仪器有限公司）；DJ-04型粉碎机（上海淀久中药机械制造有限公司）；京制0000249号电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；DRT-TW型调温电热套（郑州长城科工贸有限公司）；DZF系列真空干燥箱（上海华联医疗器械有限公司）；KUDOSSK5200LH超声仪（上海科导超声仪器有限公司）；DK-S24型电热恒温水浴锅（上海华联医疗器械有限公司）；延胡索药材（批号：131028）购自上海德华国药制品有限公司，经鉴定与2010版藥典一部正品相符；延胡索乙素对照品（中国药品生物制品检定所，批号110726-201213）；95%乙醇（上海振兴化工一厂）；纯化水（自制）；其他试剂均为分析纯。
2、方法与结果
2.1 总生物碱含量测定的方法
2.1.1 溶液的制备
1）对照品溶液的制备
精确称取适量的延胡索乙素对照品，加入一定量的无水乙醇将其制成浓度为80μg的对照品溶液，将其摇匀就得到了对照品溶液。
2）供试品溶液的制备
精确称取5g的药品提取物，将其浓缩处理，并定容到50ml，精密吸取5ml的溶液，将其放置在蒸发皿当中，水浴蒸发，去除乙醇，将5ml的水转移到分分液漏斗当中，将盐酸酸化，使其PH值为2，氯仿萃取2次，同时还要取水层，加入适量的氨水对其进行碱化，将其PH值调整到10—11，之后再进行氯仿萃取，次数为3次，将氯仿萃取液进行何必并处理，之后还要用5ml的水进行清洗，采用水浴蒸干的方式将氯仿全部蒸发干净，污水乙醇定容到25ml，在对其进行过滤处理之后还要取1ml的无水乙醇，将其定容到10ml，同时还要进行摇匀处理，就得到了供试样品溶液。
2.1.2 波长选择
取延胡索乙素对照品及延胡索提取物干膏适量，无水乙醇溶解，以无水乙醇为空白参比溶液，在200-400nm范围内波长扫描，结果表明二者均在282nm处有最大吸收峰，故本实验选282nm为最佳检测波长。
2.1.3 标准曲线的绘制
精密吸取上述对照品溶液1mL，2mL，3mL，4mL，5mL，置于10mL容量瓶中，无水乙醇定容，282nm波长处测定吸光度；以延胡索乙素的浓度（X）为横坐标，吸光度（Y）为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程：
Y=13.874X+0.0045（r2=0.9999，n=5）。结果表明：延胡索乙素在8μg.mL-1～40μg.mL-1范围内吸光度与浓度的线性关系良好。
2.1.4 精密度
取3.2μg.mL-1延胡索乙素对照品溶液，在同一条件下连续测定7次，RSD%=1.28%（n=7），结果表明方法精密度良好。
2.1.5 重复性
精密称取延胡索药材粗粉6份，每份5g，正交试验5组条件（8倍60%乙醇提取2次，每次2h），平行制备6组提取液，浓缩定容至50mL，282nm波长处测定吸光度，RSD%=1.27%（n=6），结果表明实验重复性良好。
2.1.6 稳定性
取延胡索提取物干膏适量，5mL水转移至分液漏斗中，按“2.1.1”项下供试品方法处理，282nm波长处24h内（0h，2h，4h，8h，12h，24h）测定吸光度，RSD%=2.05%（n=6），表明药物在24h内基本稳定。
2.1.7 加样回收
精密称取6份已知含量样品干膏10.7mg，其中含有1.2mg生物碱（总生物碱以延胡索乙素计），分别加入对照品0.816mg，按照供试品方法处理后，在282nm处测定吸光度，平均加样回收率102.497%，RSD%=2.64%（n=6），结果表明回收率良好。
2.1.8 总生物碱含量测定
分别取“3.1”项下得到的9组供试品溶液，按“2.1.1”项下供试品方法处理，282nm波长处测定吸光度。
2.2 干膏率的测定
精密吸取各组提取液10mL，分别置于已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，置真空干燥箱（60℃）干燥至恒重，置于干燥器中放置30min，取出，称重，计算干膏率。
3、正交试验
3.1 总生物碱乙醇提取工艺研究
取延胡索药材粗粉9份，以乙醇为提取溶剂，在文献资料及与预实验结果基础上选择不同提取时间、提取次数、不同浓度的乙醇、溶剂倍数，按正交试验表进行提取，得9份样品溶液，备用。
3.2 正交试验及结果
以延胡索总生物碱、干膏率为指标，进行L9（34）正交试验，采用中医药统计软件进行数据处理分析。
3.3 结果分析
正交试验方差分析结果显示，因素A（提取次数）为主要影响因素，影响因素的主次顺序A>C>D>B，确定提取条件的优化组合为：A3B2C3D1，即8倍60%乙醇，提取3次，每次2h。
4、讨论
在建立延胡索总生物碱含量测定方法的时候，我们充分的考虑到了单纯以生物碱含量作为考察指标的结果不够精确也不够全面，为了更好的确保试验结果的准确性和可靠性，在本实验当中选择了浸膏率为另外一个考察指标，在延胡索总生物碱含量测定方法选择的过程中，我们选择了酸碱滴定法对其进行全面的观察和考量，结果发现实验结果出现了非常明显的偏差，同时在重现性上也存在着一定的不足，在经过分析之后得出可能是色素干扰出现了这样的状况，高效液相色谱法对中药材成分含量测定的过程中不会产生非常严重的误差，具有非常好的准确性，但是消耗的时间和人力都比较大，对色谱柱也会产生一定的损害，在这样的情况下，我们采用了紫外线分光光度法对生物碱进行了钉，其操作方法非常的简单，同时也十分的迅速。
参考文献
[1] 侯晓琳，石光，王新闻，尚坤.延胡索总生物碱的提取纯化实验研究[J].中国中医药现代远程教育.2013（12）.
[2] 石俊敏，韩伟立，叶文才，陈锡桥，王一涛，张庆文.延胡索的化学成分研究（英文）[J].天然产物研究与开发.2011（04）.
[关键词]延胡索；生物碱；干膏率；正交试验
中图分类号：U220 文献标识码：A 文章编号：1009-914X（2016）10-0357-01
延胡索是某种罂粟科植物的干燥根茎，它最为主要的化学成分就是生物碱，它能够起到非常好的活血化瘀的作用，同时也能起到行气止痛的作用，可以有非常好的补气养血的功能，此外，在止痛效果上也有着非常好的表现，除此之外，这种药物在预防和治疗胃溃疡、镇静、催眠以及抗肿瘤等方面都有着非常广泛的应用。在本实验当中主要是借助生物碱易溶于酸而难溶于碱的特性来对提取物进行纯化处理，将总生物碱的含量和干膏率当作最为重要的指标，同时还要在这一过程中采用正交试验设计法来对提取工艺进行有效的控制和处理，这样也能够促进延胡索总生物碱药理作用的深入研究。
1、仪器与材料
752型紫外可见分光光度计（上海菁华科技仪器有限公司）；DJ-04型粉碎机（上海淀久中药机械制造有限公司）；京制0000249号电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；DRT-TW型调温电热套（郑州长城科工贸有限公司）；DZF系列真空干燥箱（上海华联医疗器械有限公司）；KUDOSSK5200LH超声仪（上海科导超声仪器有限公司）；DK-S24型电热恒温水浴锅（上海华联医疗器械有限公司）；延胡索药材（批号：131028）购自上海德华国药制品有限公司，经鉴定与2010版藥典一部正品相符；延胡索乙素对照品（中国药品生物制品检定所，批号110726-201213）；95%乙醇（上海振兴化工一厂）；纯化水（自制）；其他试剂均为分析纯。
2、方法与结果
2.1 总生物碱含量测定的方法
2.1.1 溶液的制备
1）对照品溶液的制备
精确称取适量的延胡索乙素对照品，加入一定量的无水乙醇将其制成浓度为80μg的对照品溶液，将其摇匀就得到了对照品溶液。
2）供试品溶液的制备
精确称取5g的药品提取物，将其浓缩处理，并定容到50ml，精密吸取5ml的溶液，将其放置在蒸发皿当中，水浴蒸发，去除乙醇，将5ml的水转移到分分液漏斗当中，将盐酸酸化，使其PH值为2，氯仿萃取2次，同时还要取水层，加入适量的氨水对其进行碱化，将其PH值调整到10—11，之后再进行氯仿萃取，次数为3次，将氯仿萃取液进行何必并处理，之后还要用5ml的水进行清洗，采用水浴蒸干的方式将氯仿全部蒸发干净，污水乙醇定容到25ml，在对其进行过滤处理之后还要取1ml的无水乙醇，将其定容到10ml，同时还要进行摇匀处理，就得到了供试样品溶液。
2.1.2 波长选择
取延胡索乙素对照品及延胡索提取物干膏适量，无水乙醇溶解，以无水乙醇为空白参比溶液，在200-400nm范围内波长扫描，结果表明二者均在282nm处有最大吸收峰，故本实验选282nm为最佳检测波长。
2.1.3 标准曲线的绘制
精密吸取上述对照品溶液1mL，2mL，3mL，4mL，5mL，置于10mL容量瓶中，无水乙醇定容，282nm波长处测定吸光度；以延胡索乙素的浓度（X）为横坐标，吸光度（Y）为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程：
Y=13.874X+0.0045（r2=0.9999，n=5）。结果表明：延胡索乙素在8μg.mL-1～40μg.mL-1范围内吸光度与浓度的线性关系良好。
2.1.4 精密度
取3.2μg.mL-1延胡索乙素对照品溶液，在同一条件下连续测定7次，RSD%=1.28%（n=7），结果表明方法精密度良好。
2.1.5 重复性
精密称取延胡索药材粗粉6份，每份5g，正交试验5组条件（8倍60%乙醇提取2次，每次2h），平行制备6组提取液，浓缩定容至50mL，282nm波长处测定吸光度，RSD%=1.27%（n=6），结果表明实验重复性良好。
2.1.6 稳定性
取延胡索提取物干膏适量，5mL水转移至分液漏斗中，按“2.1.1”项下供试品方法处理，282nm波长处24h内（0h，2h，4h，8h，12h，24h）测定吸光度，RSD%=2.05%（n=6），表明药物在24h内基本稳定。
2.1.7 加样回收
精密称取6份已知含量样品干膏10.7mg，其中含有1.2mg生物碱（总生物碱以延胡索乙素计），分别加入对照品0.816mg，按照供试品方法处理后，在282nm处测定吸光度，平均加样回收率102.497%，RSD%=2.64%（n=6），结果表明回收率良好。
2.1.8 总生物碱含量测定
分别取“3.1”项下得到的9组供试品溶液，按“2.1.1”项下供试品方法处理，282nm波长处测定吸光度。
2.2 干膏率的测定
精密吸取各组提取液10mL，分别置于已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，置真空干燥箱（60℃）干燥至恒重，置于干燥器中放置30min，取出，称重，计算干膏率。
3、正交试验
3.1 总生物碱乙醇提取工艺研究
取延胡索药材粗粉9份，以乙醇为提取溶剂，在文献资料及与预实验结果基础上选择不同提取时间、提取次数、不同浓度的乙醇、溶剂倍数，按正交试验表进行提取，得9份样品溶液，备用。
3.2 正交试验及结果
以延胡索总生物碱、干膏率为指标，进行L9（34）正交试验，采用中医药统计软件进行数据处理分析。
3.3 结果分析
正交试验方差分析结果显示，因素A（提取次数）为主要影响因素，影响因素的主次顺序A>C>D>B，确定提取条件的优化组合为：A3B2C3D1，即8倍60%乙醇，提取3次，每次2h。
4、讨论
在建立延胡索总生物碱含量测定方法的时候，我们充分的考虑到了单纯以生物碱含量作为考察指标的结果不够精确也不够全面，为了更好的确保试验结果的准确性和可靠性，在本实验当中选择了浸膏率为另外一个考察指标，在延胡索总生物碱含量测定方法选择的过程中，我们选择了酸碱滴定法对其进行全面的观察和考量，结果发现实验结果出现了非常明显的偏差，同时在重现性上也存在着一定的不足，在经过分析之后得出可能是色素干扰出现了这样的状况，高效液相色谱法对中药材成分含量测定的过程中不会产生非常严重的误差，具有非常好的准确性，但是消耗的时间和人力都比较大，对色谱柱也会产生一定的损害，在这样的情况下，我们采用了紫外线分光光度法对生物碱进行了钉，其操作方法非常的简单，同时也十分的迅速。
参考文献
[1] 侯晓琳，石光，王新闻，尚坤.延胡索总生物碱的提取纯化实验研究[J].中国中医药现代远程教育.2013（12）.
[2] 石俊敏，韩伟立，叶文才，陈锡桥，王一涛，张庆文.延胡索的化学成分研究（英文）[J].天然产物研究与开发.2011（04）.