【摘 要】
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目的 探讨葡萄糖神经酰胺合成酶(glucosylceramide synthase,GCS)在白血病细胞耐药形成过程中是否经过细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)通路
【机 构】
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江苏省苏州大学医学部病理生理学教研室,无锡市人民医院中心实验室
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目的 探讨葡萄糖神经酰胺合成酶(glucosylceramide synthase,GCS)在白血病细胞耐药形成过程中是否经过细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)通路影响P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的表达.方法 应用RNA干扰技术和实时荧光定量PCR技术观察针对GCS的siRNA(GCSsiRNA)及ERK特异性化学抑制剂U0126分别作用于白血病耐药细胞株K562/A02细胞后,MDRl mRNA在不同情况下的表达情况；同时应用Western印迹法检测转染GCSsiRNA后细胞中ERKl/2(extracellar signal-regulated kinase 1/2)蛋白的磷酸化及非磷酸化的变化,以及各组中P-gp的表达情况.结果 与空白对照组比较,当ERK抑制剂U0126的浓度为10 μmo1/L时,对磷酸化-ERKI/2(phosphorylated ERKl/2,P-ERK1/2)无明显抑制,P-gp表达亦无明显差别；而随着U0126浓度的逐渐升高,达到20 μmol/L、40 μmol/L、60 μmol/L时,对P-ERK1/2的抑制则呈浓度依赖性增强,同时P-gp的表达水平亦明显下调.RNA干扰实验显示:GCSsiRNA组的GCSmRNA表达被明显抑制,抑制率为70.50％(58.00％～76.00％);与阴性干扰对照组比较,GCSsiRNA组在siRNA转染72 h后P-ERK1/2的表达水平显著下调(P＜0.01),同时P-gp的表达亦明显下调(P＜0.05).结论GCS可通过ERK1/2信号通路调控多药耐药蛋白P-gp的表达.
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