目的 探讨人晶状体上皮细胞(HLEC)特异性启动子LEP503调控的Cre/LoxP增强型自杀基因(HSV-tk/GCV)系统在眼内主要细胞中的特异性表达及杀伤作用.方法 实验研究.利用分子克隆技术,构建HLEC特异性启动子LEP503调控的HSV-tk/GCV系统并进行慢病毒包装.分别在HLEC、视网膜色素上皮细胞(RPEC)、小鼠成纤维细胞(NIH3T3)、293T细胞中转人此系统,3d后观察4组细胞增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达情况,并收集HLEC和RPEC,通过RT-PCR检测HSV-tk的表达差异.20 mg/L丙氧鸟苷(GCV)作用后,CCK-8试剂盒和流式细胞仪检测HSV-tk/GCV系统对HLEC和RPEC的杀伤作用.采用单因素方差分析Scheffe两两比较法对各组RPEC活性进行比较.结果 HSV-tk/GCV系统在RPEC、NIH3T3、293T细胞中EGFP表达效率分别为62.3％,68.3％,75.8％；在HLEC中EGFP表达效率为17.5％.RT-PCR检测显示HLEC内有较高的HSV-tk表达,相对灰度值为4.01,而RPEC中HSV-tk表达微弱,相对灰度值为0.29.20 mg/L GCV作用72 h后流式细胞仪检测:HLEC组的细胞凋亡率为76.51％,而RPEC组仅为2.44％.CCK-8试剂盒检测细胞增殖抑制情况显示:20 mg/L GCV作用72 h后LEP503调控的HSV-tk/GCV转染的RPEC活性0.9198 ±0.06与正常RPE组0.9672±0.02和阴性对照RPE组0.8927±0.07相比,差异无统计学意义[组间均数差值(MD)分别为MD1=-0.047,P=0.671；MD2 =0.027,P=0.912].结论 HLEC特异性启动子LEP503调控的Cre/LoxP增强型自杀基因系统在HLEC中能特异性表达HSV-tk,GCV作用后可特异性抑制HLEC增殖,但对RPEC无明显杀伤作用。
晶状体上皮细胞启动子LEP503调控的自杀基因系统细胞特异性表达研究
【摘 要】
：
目的 探讨人晶状体上皮细胞(HLEC)特异性启动子LEP503调控的Cre/LoxP增强型自杀基因(HSV-tk/GCV)系统在眼内主要细胞中的特异性表达及杀伤作用.方法 实验研究.利用分子克隆技术,构建HLEC特异性启动子LEP503调控的HSV-tk/GCV系统并进行慢病毒包装.分别在HLEC、视网膜色素上皮细胞(RPEC)、小鼠成纤维细胞(NIH3T3)、293T细胞中转人此系统,3d后观察
【机 构】
：
200031上海,复旦大学附属眼耳鼻喉医院眼科,200031上海,复旦大学附属眼耳鼻喉医院眼科,中国科学院上海细胞生物学研究所,200031上海,复旦大学附属眼耳鼻喉医院眼科,200031上海,复旦大
【发表日期】
：
2012年48期
论文部分内容阅读
其他文献
目的 探讨纤维蛋白黏合剂在部分板层角膜移植术中的应用及临床效果.方法 回顾性系列病例研究.选择2007年6月至2009年6月在厦门大学附属厦门眼科中心住院的21例(21只眼)不同病因角膜病患者,根据病灶的大小和形状,采用纤维蛋白黏合剂行无缝线部分板层角膜移植术,术后随访4～20个月,观察患者术后视力、植片情况及并发症.手术前后视力的统计学比较采用配对t检验.结果 21例患者原发病分别为Terrie
MicroRNA(miRNA)是近年来发现的普遍存在于生物基因组的非编码蛋白质的单链小RNA,长约22个核苷酸.它们通过在转录后和翻译水平调节基因表达而调控生理和病理过程.在眼部组织表达的miRNA有百余种,它们在眼部发育,分化,损伤后再生以及昼夜节律调控等生理过程中发挥重要的调控功能.另一方面,miRNA也在眼部新生血管生成,自身免疫性葡萄膜炎,视网膜色素变性,青光眼和视网膜母细胞瘤等病变的发生
眼附属器淋巴瘤是成人眼眶内最常见的恶性肿瘤,相对于其他肿瘤,其病理诊断和分类比较复杂,与某些淋巴组织反应性增生病变的鉴别相当困难.为此,熟悉世界卫生组织关于各种类型淋巴瘤诊断和分类的标准,重视规范化病理诊断技术的应用均有助于淋巴瘤的病理诊断和分类,以及眼附属器淋巴瘤与淋巴组织反应性增生病变的鉴别。
患儿男性,6岁.因右眼上睑肿胀近1年,于2010年9月7日来北京同仁医院眼肿瘤科就诊.患儿1年前无明显诱因出现右眼上睑红肿,无眼红、眼痛、流泪及瘙痒,无视力下降和复视,无发热等全身症状,未予诊治.发病以来,患儿右眼上睑红肿逐渐加重,右眼眼球逐渐前突.患儿家长述其曾患皮肤湿疹多年,已基本治愈。
期刊
青光眼是目前全世界最重要的不可逆致盲性眼病之一,其早期诊断和治疗是决定预后的关键.相干光断层扫描(OCT)具有非接触性、高分辨率、可重复性好、获取眼部图像快等优点,已在眼科领域广泛应用.近年来OCT检测技术也逐步应用于青光眼的诊断和随访观察方面,如检测青光眼患者的视网膜神经纤维层厚度、视乳头形态、视网膜神经节细胞参数、前房和前房角参数、虹膜和脉络膜厚度、晶状体改变及评价术后滤过泡形态等.因此,有必
激光角膜屈光手术术后角膜生物力学特性会发生改变,评估这一改变需要综合多个生物力学的指标.准分子激光原位角膜磨镶术(LASIK)后角膜生物力学特性中的应力会明显降低,薄瓣有助于维护原有应力.表层切削在角膜生物力学稳定性优于LASIK.飞秒激光能完成平滑整齐的切面并进行边角设计,制作的角膜瓣与下方基质床间贴附更牢固,对角膜生物力学稳定性的干扰较小.重视并维护角膜生物力学可使角膜屈光手术更安全并且效果更
目的 对常染色体显性遗传晶状体脱位( EL)一家系进行致病基因研究.方法 通过询问病史及系谱分析确定遗传模式.对所有患者进行临床检杳,包括眼部、心脏以及骨骼确定临床表型.采集患者外周静脉血5 ml,提取基因组DNA.采用微卫星标记引物,通过连锁分析进行致病基因定位,两点法计算LOD值.采用直接测序法对致病基因全部外显子,以及外显子与内含子拼接部进行基因序列分析.结果 该家系为常染色体显性遗传模式.
目的 探讨糖尿病患者发生视网膜病变的眼部生物结构特征及其危险因素.方法 回顾性病例系列研究.收集118例病程超过10年的2型糖尿病患者临床资料进行回顾性分析,包括患者全身和实验室检查情况、眼底改变、糖尿病视网膜病变(DR)程度、相干光生物测量仪及屈光检测资料.同时以50例非糖尿病性白内障患者的临床资料进行对比.根据病变程度,将糖尿病患者分为3组:0组无DR,1组轻中度DR,2组威胁视力DR.采用广
目的 初步探索抗髓鞘少突胶质细胞糖蛋白抗体(MOG-Ab)在不同临床类型免疫介导性视神经炎(IM-ON)患者血清中的表达.方法 采用临床病例横断面研究.2010年5月至2011年2月至北京同仁医院神经内科就诊的免疫介导性视神经炎患者(IM-ON) 129例,根据其临床特点分为以下5组:多发性硬化相关视神经炎(MS-ON) 20例,视神经脊髓炎相关视神经炎(NMO-ON) 13例,自身免疫病相关视神