【摘 要】
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旨在揭示miR-200b在绵羊卵泡颗粒细胞的作用.本研究利用在线工具(TargetScan、miRTarBase及miRDB)预测miR-200b的靶基因,并利用KOBAS对其进行GO和KEGG通路富集分析.将分离培养的绵羊卵泡颗粒细胞分为4组,分别转染miR-200b mimic、mimic NC、miR-200b inhibitor和inhibitor NC,每组6个重复.采用CCK8法分别检测转染24、48和72 h颗粒细胞的存活率;采用荧光定量PCR检测miR-200b、CDK4、CDK6、CC-
【机 构】
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河北农业大学动物科技学院,保定071001
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旨在揭示miR-200b在绵羊卵泡颗粒细胞的作用.本研究利用在线工具(TargetScan、miRTarBase及miRDB)预测miR-200b的靶基因,并利用KOBAS对其进行GO和KEGG通路富集分析.将分离培养的绵羊卵泡颗粒细胞分为4组,分别转染miR-200b mimic、mimic NC、miR-200b inhibitor和inhibitor NC,每组6个重复.采用CCK8法分别检测转染24、48和72 h颗粒细胞的存活率;采用荧光定量PCR检测miR-200b、CDK4、CDK6、CC-ND1、CCND2、Bax和Bcl-2基因的表达水平.利用3种在线工具预测到25个miR-200b的共同靶基因,GO和KEGG通路富集分析发现这些基因富集在细胞的增殖分化、细胞周期及生殖发育过程;转染miR-200b mimic、miR-200b inhibitor和NC后,颗粒细胞存活率随时间延长呈“V”型趋势降低,且48 h达最低(P＜0.01);miR-200b in-hibitor与inhibitor NC组相比,miR-200b表达量无显著差异(P＞0.05);与mimic NC相比,miR-200b mimic组极显著促进miR-200b表达(P＜0.001),显著下调CDK4(P＜0.01)、CDK6(P＜0.001)和CCND1(P＜0.001)、CCND2(P＜0.05)和Bcl-2(P＜0.01)基因表达水平,Bax表达并无显著变化(P＞0.05),且极显著下调Bcl-2与Bax比值(P＜0.001).综上所述,miR-200b抑制绵羊卵泡颗粒细胞细胞周期和增殖并促进其凋亡.
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