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【摘要】 目的：对慢性胃炎湿证患者血清蛋白组学进行分析，并探讨慢性胃炎湿证的微观信息。方法：采用表面增強激光解吸离子化蛋白质芯片分析仪对18例慢性胃炎湿证、17例非湿证患者及8例正常人血清蛋白质表达谱进行研究。结果：慢性胃炎湿证患者蛋白质表达谱质荷比为3.2kD、6.4 kD、8.1kD，出现高表达趋势，其波峰基本在10个单位以上；非湿证患者与正常人上述波谱峰呈低表达趋势，非湿证患者波峰基本在10个单位左右或以下；正常人波峰基本在5个单位以下。结论：血清蛋白组学分析对探索慢性胃炎湿证的生物学理论基础有一定意义。
【关键词】 慢性胃炎; 湿证; 血清; 蛋白组学
2001年Nature和Science杂志公布人类基因组草图的同时，分别发表了述评，认为蛋白质组学将成为21世纪人类最大战略资源。蛋白组学技术忽略了组织器官的解剖定位，强调的是生物化学的某一环节的改变和疾病过程的内在联系。通过蛋白组学研究，从一个机体或一个组织、一个细胞等不同层次“整体”的蛋白质活动的角度来揭示和阐明证候形成与发展的基本规律，这种研究思路与中医整体观和中药多靶点整合调节的特点不谋而合，具有明显的中医特色［1］。我们应用蛋白组学分析技术对慢性胃炎湿证患者血清蛋白质谱进行分析，探讨慢性胃炎湿证的实质，为中医证候的规范化研究建立一种新的手段。
1 对象与方法
1.1 病例选择于2003年10月至2004年2月在上海市第八人民医院胃镜室采集35例慢性胃炎患者的静脉血液6 ml，3 000r/min离心1次，离心10min，取血清。慢性胃炎诊断标准参照2000年中华医学会消化病学分会全国慢性胃炎研讨会意见［2］；同时参考1989年中国中西医结合学会消化系统疾病专业委员会制订的慢性胃炎辨证分型标准［3］分为湿证组18例和非湿证组17例。另采集8名正常人血清作为对照。
1.2 试验方法重复下述实验3次。
1.2.1 样品制备血清稀释分装10 μl。
1.2.2 蛋白质波谱峰。 选用美国赛弗吉公司的蛋白质生物系统PBSⅡ、表面增强激光解吸离子化质谱，用MCX2芯片，血清标本以不同pH、不同盐浓度的洗液洗脱，以获得尽量多的蛋白质波谱峰。加样好的蛋白质芯片，置入表面增强激光解吸离子化飞行时间蛋白质芯片系统（PBSⅡ）进行检测，选择不同参数寻找波谱峰。探索合适的分辨标准——蛋白质组波谱模型。
1.2.3 用流行病学临床筛选试验确定合适的试验阳性预测值。将湿证、非湿证患者血清样品与正常血清样品统一编号，采用盲法进行波谱分析，出现上述特征峰即为阳性。计算灵敏度（A/A＋C）即真阳性率，特异度（D/B＋D）即真阴性率，试验阳性预测值（A/A＋B）等。
2 结果
慢性胃炎湿证、非湿证患者及正常人血清蛋白组学结果显示：湿证患者蛋白质表达谱质荷比为3.2 kD、6.4 kD和8.1 kD，三个肽出现高表达趋势，其波峰基本在10个单位以上。非湿证患者与正常人在上述质荷比值呈低表达趋势，非湿证患者波峰基本在10个单位左右或以下，而正常人波峰基本在5个单位以下。
3 讨论
表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱蛋白质芯片技术是继基因芯片后，在基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱技术的基础上发展起来的研究蛋白质组的最新技术，对肿瘤、慢性病的研究及其早期诊断、预防和疾病治疗药物的筛选具有重要意义［4］。低分子量的血清蛋白质波谱可能反映组织的病理状态，并有助于疾病早期检测。生物质谱SELDITOF能够获得此范围的蛋白质波谱，这些波谱包含上千个数据点，因此，用SELDI技术比较正常和病变样本，可以进行差异蛋白的研究，进而用来诊断未知样本。
本研究采用美国赛弗吉公司的蛋白质生物系统PBSⅡ、SELDITOF质谱进行测定，再结合高等级的分析方法，对湿证、非湿证病人血清样品进行研究，以建立一个合适的分辨标准——蛋白质组波谱模型。应用该模型对来自湿证、非湿证病人及正常人的血清样品进行盲法分析预测，确定阳性预测值、阴性预测值、假阳性率和假阴性率等。然后以合适的阳性预测值的蛋白质组分析方法作为可被接受用于人群的筛选方法。
传统的中医辨证只停留在用望、闻、问、切四诊来搜集临床资料，具有一定的主观性，又缺乏客观的量化指标，影响了辨证的准确性。不同的人对客观事物——疾病的把握尺度不同，理解各不相同，很多具有重要意义的临床经验仅为医家各自多年的心得体会，阻碍了中医事业的继承和发展。中医证的本质研究将对中药临床药效学的研究提供帮助。基于蛋白质组研究的辨证论治是应用现代科学语言对传统中医理论更好的阐释，更易在国际上获得认可，使中医走向世界。
参考文献
［1］方福德. 人类基因组图谱研究能给我们带来什么. 医学与哲学. 2000; 21(11): 16-20.
［2］中华医学会消化病学分会. 全国慢性胃炎研讨会共识意见. 中华消化杂志. 2000; 20(3): 199-201.
［3］陈贵延, 杨思澍. 实用中西医结合诊断治疗学. 北京: 中国医药科技出版. 1991: 432-433.
［4］刘为民. 中医证候学研究与证候蛋白质组学. 中医药学报. 2003; 31(3): 1.
【关键词】 慢性胃炎; 湿证; 血清; 蛋白组学
2001年Nature和Science杂志公布人类基因组草图的同时，分别发表了述评，认为蛋白质组学将成为21世纪人类最大战略资源。蛋白组学技术忽略了组织器官的解剖定位，强调的是生物化学的某一环节的改变和疾病过程的内在联系。通过蛋白组学研究，从一个机体或一个组织、一个细胞等不同层次“整体”的蛋白质活动的角度来揭示和阐明证候形成与发展的基本规律，这种研究思路与中医整体观和中药多靶点整合调节的特点不谋而合，具有明显的中医特色［1］。我们应用蛋白组学分析技术对慢性胃炎湿证患者血清蛋白质谱进行分析，探讨慢性胃炎湿证的实质，为中医证候的规范化研究建立一种新的手段。
1 对象与方法
1.1 病例选择于2003年10月至2004年2月在上海市第八人民医院胃镜室采集35例慢性胃炎患者的静脉血液6 ml，3 000r/min离心1次，离心10min，取血清。慢性胃炎诊断标准参照2000年中华医学会消化病学分会全国慢性胃炎研讨会意见［2］；同时参考1989年中国中西医结合学会消化系统疾病专业委员会制订的慢性胃炎辨证分型标准［3］分为湿证组18例和非湿证组17例。另采集8名正常人血清作为对照。
1.2 试验方法重复下述实验3次。
1.2.1 样品制备血清稀释分装10 μl。
1.2.2 蛋白质波谱峰。 选用美国赛弗吉公司的蛋白质生物系统PBSⅡ、表面增强激光解吸离子化质谱，用MCX2芯片，血清标本以不同pH、不同盐浓度的洗液洗脱，以获得尽量多的蛋白质波谱峰。加样好的蛋白质芯片，置入表面增强激光解吸离子化飞行时间蛋白质芯片系统（PBSⅡ）进行检测，选择不同参数寻找波谱峰。探索合适的分辨标准——蛋白质组波谱模型。
1.2.3 用流行病学临床筛选试验确定合适的试验阳性预测值。将湿证、非湿证患者血清样品与正常血清样品统一编号，采用盲法进行波谱分析，出现上述特征峰即为阳性。计算灵敏度（A/A＋C）即真阳性率，特异度（D/B＋D）即真阴性率，试验阳性预测值（A/A＋B）等。
2 结果
慢性胃炎湿证、非湿证患者及正常人血清蛋白组学结果显示：湿证患者蛋白质表达谱质荷比为3.2 kD、6.4 kD和8.1 kD，三个肽出现高表达趋势，其波峰基本在10个单位以上。非湿证患者与正常人在上述质荷比值呈低表达趋势，非湿证患者波峰基本在10个单位左右或以下，而正常人波峰基本在5个单位以下。
3 讨论
表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱蛋白质芯片技术是继基因芯片后，在基质辅助激光解吸离子化飞行时间质谱技术的基础上发展起来的研究蛋白质组的最新技术，对肿瘤、慢性病的研究及其早期诊断、预防和疾病治疗药物的筛选具有重要意义［4］。低分子量的血清蛋白质波谱可能反映组织的病理状态，并有助于疾病早期检测。生物质谱SELDITOF能够获得此范围的蛋白质波谱，这些波谱包含上千个数据点，因此，用SELDI技术比较正常和病变样本，可以进行差异蛋白的研究，进而用来诊断未知样本。
本研究采用美国赛弗吉公司的蛋白质生物系统PBSⅡ、SELDITOF质谱进行测定，再结合高等级的分析方法，对湿证、非湿证病人血清样品进行研究，以建立一个合适的分辨标准——蛋白质组波谱模型。应用该模型对来自湿证、非湿证病人及正常人的血清样品进行盲法分析预测，确定阳性预测值、阴性预测值、假阳性率和假阴性率等。然后以合适的阳性预测值的蛋白质组分析方法作为可被接受用于人群的筛选方法。
传统的中医辨证只停留在用望、闻、问、切四诊来搜集临床资料，具有一定的主观性，又缺乏客观的量化指标，影响了辨证的准确性。不同的人对客观事物——疾病的把握尺度不同，理解各不相同，很多具有重要意义的临床经验仅为医家各自多年的心得体会，阻碍了中医事业的继承和发展。中医证的本质研究将对中药临床药效学的研究提供帮助。基于蛋白质组研究的辨证论治是应用现代科学语言对传统中医理论更好的阐释，更易在国际上获得认可，使中医走向世界。
参考文献
［1］方福德. 人类基因组图谱研究能给我们带来什么. 医学与哲学. 2000; 21(11): 16-20.
［2］中华医学会消化病学分会. 全国慢性胃炎研讨会共识意见. 中华消化杂志. 2000; 20(3): 199-201.
［3］陈贵延, 杨思澍. 实用中西医结合诊断治疗学. 北京: 中国医药科技出版. 1991: 432-433.
［4］刘为民. 中医证候学研究与证候蛋白质组学. 中医药学报. 2003; 31(3): 1.