【摘 要】
：
[目的]LmKnickkopf3-5\'(LmKnk3-5\')是飞蝗(Locusta migratoria)蜕皮发育中重要的表皮蛋白.本文旨在制备LmKnk3-5\'特异抗体并对其进行组织定位,为LmKnk3-5\'生物学功能研究提供蛋白水平的证据,同时为进一步深入探究LmKnk3-5\'与其他表皮蛋白在飞蝗表皮形成过程中的协同作用打下基础.[方法]首先比对飞蝗Knickkopf(Knk)家族4个基因LmKnk、LmKnk2、LmKnk3-FL和LmKnk3-5\'的氨基酸序列,
【机 构】
：
山西大学应用生物学研究所,太原 030006;山西大同大学生命科学学院,山西大同 037009;山西大学应用生物学研究所,太原 030006
论文部分内容阅读
[目的]LmKnickkopf3-5\'(LmKnk3-5\')是飞蝗(Locusta migratoria)蜕皮发育中重要的表皮蛋白.本文旨在制备LmKnk3-5\'特异抗体并对其进行组织定位,为LmKnk3-5\'生物学功能研究提供蛋白水平的证据,同时为进一步深入探究LmKnk3-5\'与其他表皮蛋白在飞蝗表皮形成过程中的协同作用打下基础.[方法]首先比对飞蝗Knickkopf(Knk)家族4个基因LmKnk、LmKnk2、LmKnk3-FL和LmKnk3-5\'的氨基酸序列,选取LmKnk3-5\'的3段特异抗原序列R1、R2和R3,设计包含BamH I、HindⅢ酶切位点的引物,以LmKnk3-5\'全长cDNA为模板,PCR获得LmKnk3-5\'的特异抗原片段;然后将特异抗原片段与pET-32a经双酶切、T4连接酶连接、测序验证、成功构建重组质粒后,转入BL21(DE3)表达菌株中,加入IPTG(终浓度0.5 mmol·L-1)低温(16℃)诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE检测重组蛋白表达情况;接着扩大培养可在菌体裂解液的上清中表达重组融合蛋白的大肠杆菌,提取蛋白并用Ni-NTA对其进行纯化,之后再用纯化后的重组特异抗原免疫小鼠4次,获得anti-LmKnk3-5\'多克隆抗体,ELISA法对其进行效价检测,并用Western blot法检测其特异性.取飞蝗5龄若虫第8天表皮,制备石蜡切片,通过免疫组化法对LmKnk3-5\'蛋白进行组织定位.[结果]通过氨基酸序列比对,选取LmKnk3-5\'的特异抗原区域R1、R2和R3,分别包含208、147和131个氨基酸残基,蛋白理论分子量分别为24.0、17.0和14.8 kD.酶切连接后,成功获得pET-32a-R1、pET-32a-R2和pET-32a-R3重组质粒.诱导表达检测,发现只有含pET-32a-R2的表达菌在菌体裂解液的上清液中大量表达重组蛋白.将其扩大培养纯化后获得R2重组融合蛋白,免疫小鼠取抗血清进行效价检测,抗体效价高达1﹕512000,可满足抗体使用需求.Western blot结果表明,注射dsLmKnk3-5\'后飞蝗体壁LmKnk3-5\'的蛋白表达显著减少,表明anti-LmKnk3-5\'抗体特异性良好.免疫组化试验结果表明,表皮蛋白LmKnk3-5\'在飞蝗腹部体壁皮细胞及新表皮中均有分布,特别是新合成的外表皮顶端.[结论]成功获得飞蝗LmKnk3-5\'多克隆抗体,证明其特异性良好.LmKnk3-5\'在飞蝗腹部体壁新合成的外表皮顶端分布较多.研究结果为飞蝗表皮蛋白LmKnk3-5\'功能研究提供了蛋白水平的证据.
其他文献
[背景]水稻是我国最重要的口粮作物.东北稻区不仅是我国高纬度优质粳稻的重要产区,约占我国粳稻总产50％以上;也是我国气候变暖最明显区域,近半个世纪来该区年平均气温上升了1.1℃.[目的]研究气候变暖情境下东北稻区水稻产量和品质的变化,为保障我国优质粳稻生产提供参考依据.[方法]结合田间开放式远红外增温装置,设置全生育期增温1.5℃和不增温处理,分析田间开放式增温1.5℃对高纬度粳稻生育期、产量及产量构成、加工品质、外观品质、营养品质和蒸煮品质的影响.[结果]与不增温相比,2017年和2018年增温处理的水
[目的]吐絮率是反映陆地棉(Gossypium hirsutum L.)早熟性状的重要指标之一,利用全基因组关联分析(genome-wide association study,GWAS)解析吐絮率的QTL(quantitative trait locus)及其遗传效应,为陆地棉早熟性状的分子育种提供理论基础.[方法]利用315份不同陆地棉品种(系)构成的自然群体,在3个环境下对吐絮率进行表型鉴定.同时利用前期构建的9244个具有复等位变异SNP连锁不平衡区段(SNP linkage disequilib
[目的]明确播期对再生稻次适宜区杂交籼稻食味品质的影响,为再生稻次适宜区种植结构调整和优质栽培提供理论和实践依据.[方法]以川优6203、宜香优2115和F优498等3个杂交籼稻品种为试验材料,在四川再生稻次适宜区的隆昌和犍为设置播期试验,通过对稻米直链淀粉和蛋白质含量测定,以及米饭气味、外观、适口性、滋味、冷饭质地和综合评分等指标的分析,研究播期对再生稻次适宜区杂交籼稻食味品质的影响.[结果](1)杂交籼稻食味品质受生态点、播期、品种及其互作共同调控.(2)在再生稻次适宜区,播期对不同品种食味品质的影响
[目的]建立和完善玉米种质抗腐霉茎腐病和镰孢茎腐病精准鉴定的方法,对遗传背景丰富的玉米种质资源进行腐霉茎腐病和镰孢茎腐病的抗性精准鉴定,筛选出对2种茎腐病具有稳定抗性的种质资源,为玉米抗病育种奠定基础.[方法]对2004份具有广泛遗传背景的玉米种质进行多年多点的自然发病抗性鉴定,初步筛选出抗茎腐病或综合性状优良的代表性种质,用于人工接种鉴定;利用建立的茎基部注射接种法,对690份代表性玉米种质进行3年共6个环境的抗腐霉茎腐病和镰孢茎腐病精准鉴定.[结果]2016—2018年,在田间自然发病条件下,通过多年
[目的]拟探讨等距单粒线播技术用于定量种间距对小麦前、后生育期的影响,以此论证等距单粒线播的技术特征及优势.[方法]选用宁麦13为田间试验材料,采用免耕等距单粒线播法,分别于2017和2018年进行稻茬小麦的免耕种植试验,设置粒距1.5、3.0和4.5 cm 3个处理(T1.5、T3、T4.5),行距20 cm.分别从群体、单株以及单茎穗3个尺度层次的指标对比,评价种间距在苗期和成熟期的生理生态效应.[结果]等距单粒线播法创建出稳定全生育期密度效应且该效应能够为群体、单株与器官3个尺度层次的表型所表达.较
[目的]通过研究不同配置条件下玉米‖花生间作系统地上部氮含量和吸收量,结合间作系统花生结瘤固氮和土壤有效氮分布,明确不同配置下玉米‖花生间作体系对氮素的吸收利用特征,为玉米‖花生间作氮高效利用模式的区域筛选提供依据.[方法]本试验于2015—2016年在国家农业环境阜新观测实验站进行,设置玉米单作(M)、花生单作(P)、2行玉米4行花生间作(M2P4)和4行玉米4行花生间作(M4P4)模式,玉米单作及每种间作模式下设3种不同玉米种植密度(6、9和12株/m2),共10个处理,分析不同配置(行比和密度)玉米
[背景]柑橘黄龙病(Huanglongbing,HLB)是由候选韧皮部杆菌亚洲种(\'Candidatus Liberibacter asiaticus\',CLas)侵染引起的一种柑橘病害.对于该病害的防治主要采取综合措施,包括实施检疫、种植无病苗木、及时挖除病树和集中大面积联防联控柑橘木虱等.前3种方法都需要依靠准确的柑橘黄龙病诊断技术.[目的]利用环介导等温扩增技术(loop-mediated isothermal amplification,LAMP),结合膜吸附法DNA快速提取和Gelg
[目的]梨小食心虫(Grapholitha molesta)是南疆苹果园一种重要害虫,严重影响苹果的产量和品质.论文旨在明确农田景观配置与组成对苹果园梨小食心虫种群数量的影响,为解析南疆地区种植业结构调整下梨小食心虫的发生趋势及灾变机制并制定种群区域治理对策提供科学依据.[方法]2017—2020年,在阿克苏地区共选择50个苹果园作为试验点,利用性诱剂诱捕监测梨小食心虫成虫种群动态,并调查试验点周围2.0 km半径范围的景观格局.在此基础上,拟合0.5、1.0、1.5、2.0 km尺度下景观格局的香农多样
[目的]探究不同轮作体系对土壤磷素有效性的影响,评估不同轮作体系土壤磷素活化潜力,为农田磷素高效利用提供科学依据.[方法]试验于2018—2020年在江苏省如皋市农业科学研究所开展,设置水稻-小麦(R-W)、水稻-油菜(R-O)、水稻-包菜(R-C)、水稻-闲田(R-F)4个轮作模式,每种轮作模式下设置3种施肥处理,分别为不施肥处理(CK)、不施磷处理(NK)、氮磷钾肥处理(NPK).通过分析旱季和稻季成熟期不同施肥条件下地上部作物吸磷量、土壤磷组分含量、土壤微生物量及碱性磷酸酶活性等,明确不同水旱轮作体
[目的]明确水稻内生菌嗜碱假单胞菌(Pseudomonas alcaliphila)菌株Ej2对镰孢菌(Fusarium spp.)等病原菌的抑菌效果,重点研究对稻瘟病的防治作用及对水稻内源激素的影响,为稻瘟病菌(Magnaportheoryzae)杀菌剂的研发提供新的生防菌资源.[方法]嗜碱假单胞菌菌株Ej2分离于水稻叶片,采用对峙培养法测试该菌株对稻瘟病菌以及对镰孢菌、草莓炭疽病菌(Colletotrichum gloeospoioides)、链格孢苹果专化型(Alternaria alternata