【摘 要】
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该文研究川芎嗪（tetramethylpyrazine, TMP）能否通过刺激脑微血管内皮细胞促进血管新生，缓解缺血性脑卒中（cerebral ischemic stroke, CIS）并探讨其作用机制。体内实验：成年sprague-dawley（SD）大鼠，假手术（sham）组、大脑中动脉闭塞再灌注（middle cerebral artery occlusion/reperfusion, MC
【基金项目】
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国家自然科学基金项目（82004028）； 中国博士后科学基金面上项目（2020M680912）； 国家中医药管理局“张仲景传承与创新专项”（GZY-KJS-2022-048-1）； 山西省科技创新人才青年团队项目（202204051001028）； 山西中医药大
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该文研究川芎嗪（tetramethylpyrazine, TMP）能否通过刺激脑微血管内皮细胞促进血管新生，缓解缺血性脑卒中（cerebral ischemic stroke, CIS）并探讨其作用机制。体内实验：成年sprague-dawley（SD）大鼠，假手术（sham）组、大脑中动脉闭塞再灌注（middle cerebral artery occlusion/reperfusion, MCAO/R）组、MCAO/R+TMP组(腹腔注射20 mg·kg-1)。采用Z-Longa法评估神经功能；TTC染色检测脑梗死体积，酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA）检测血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor, VEGF）、血管生成素（angiopoietin, Ang）和血小板衍生生长因子（platelet-derived growth factor, PDGF）;免疫荧光检测Ki67、血管内皮生长因子A（vascular endothelial growth factor A,VEGFA）、沉默信息调节因子1（slient information regulator 1,SIRT1）;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测VEGFA、SIRT1、血管生成素-2（angiopoietin-2,Ang-2）和血小板衍生生长因子B（platelet-derived growth factor B,PDGFB）。体外实验：培养小鼠脑微血管内皮细胞（brain-derived endothelial cells.3,Bend.3）,确定TMP的最佳药物浓度；加入血管新生抑制剂卡博替尼（cabozantinib, BMS）,ELISA检测VEGF、Ang和PDGF;Western blot检测VEGFA、Ang-2和PDGFB;免疫荧光染色检测CD31、CD34、Ki67;成管实验观察Bend.3细胞增殖、迁移和管腔形成的能力。加入SIRT1特异性抑制剂selisistat （EX-527）检测SIRT1和VEGFA的蛋白和免疫荧光，观察TMP对SIRT1/VEGFA通路的调控。结果显示，在体内实验中与sham组相比，MCAO/R组神经功能受损严重，脑梗死体积增大，VEGF、VEGFA、Ang、Ang-2、PDGF和PDGFB表达上升，Ki67和SIRT1表达下降（P＜0.01）。与MCAO/R组相比，MCAO/R+TMP组神经功能受损症状改善、脑梗死体积明显缩小，激活了VEGF、VEGFA、Ang、Ang-2、PDGF和PDGFB、Ki67和SIRT1表达（P＜0.01）。体外实验中发现与sham组相比，Bend.3细胞经糖氧剥夺复糖氧（oxygen glucose deprivation/reoxygenation, OGD/R）处理后被激活（P＜0.05,P＜0.01）。与OGD/R组相比，OGD/R+TMP组VEGF、VEGFA、Ang、Ang-2、PDGF、PDGFB、SIRT1、Ki67、CD31和CD34的表达水平上调，Bend.3细胞的成管能力增强，同时不受BMS和EX-527的抑制作用（P＜0.05,P＜0.01,P＜0.001）。由此表明，TMP能通过激活SIRT1/VEGFA通路，刺激血管新生，缓解CIS损伤。
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