【摘 要】
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目的:基于N-α-乙酰基转移酶D(NATD)/叉头框蛋白A2(FOXA2)信号通路探讨其对乳腺癌转移的作用机制.方法:对不同转移能力的乳腺癌细胞系(人细胞系MDA-MB-231及其对肺转移衍生物LM2、MCF10CA1h及其转移性等基因系MCF10CA1a)进行了质谱组学分析.构建NATD过表达和敲减的MDA-MB-231和LM2细胞模型,并通过尾静脉注射到小鼠体内.在不同时点使用生物发光成像测量了肺转移负担.通过高通量反相蛋白质阵列和RNA免疫沉淀测序(RIP-Seq)分析鉴定NATD靶标.对于救援实验
【机 构】
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天津医科大学肿瘤医院乳腺二科,国家肿瘤临床医学研究中心,天津市肿瘤防治重点实验室,天津市恶性肿瘤临床医学研究中心,乳腺癌防治教育部重点实验室,天津300060
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目的:基于N-α-乙酰基转移酶D(NATD)/叉头框蛋白A2(FOXA2)信号通路探讨其对乳腺癌转移的作用机制.方法:对不同转移能力的乳腺癌细胞系(人细胞系MDA-MB-231及其对肺转移衍生物LM2、MCF10CA1h及其转移性等基因系MCF10CA1a)进行了质谱组学分析.构建NATD过表达和敲减的MDA-MB-231和LM2细胞模型,并通过尾静脉注射到小鼠体内.在不同时点使用生物发光成像测量了肺转移负担.通过高通量反相蛋白质阵列和RNA免疫沉淀测序(RIP-Seq)分析鉴定NATD靶标.对于救援实验,MDA-MB-231细胞与FOXA2和NATD过表达质粒体共转染48 h.通过Transwell测定评估细胞侵袭和迁移.分别进行免疫荧光或Western blot测定NATD和上皮-间充质转化(EMT)相关蛋白表达.结果:质谱组学分析确定NATD是受调控的蛋白质之一,并且Western blot证实了NATD蛋白在LM2和MCF10CA1a转移癌细胞中的表达高于MDA-MB-231和MCF10CA1h亲本癌细胞.NATD过表达MDA-MB-231细胞显著加剧了小鼠肺转移负担并缩短了动物的存活期;相比之下,NATD敲减LM2细胞减少了小鼠的肺定植并延长了无转移生存期.通过高通量反相蛋白质阵列和RIP-Seq分析鉴定FOXA2作为NATD靶标.在NATD过表达的MDA-MB-231细胞中,FOXA2表达明显降低.NATD过表达介导的对MDA-MB-231细胞侵袭和迁移的促进作用被FOXA2过表达逆转.此外,免疫荧光和Western blot分析显示,NATD过表达介导MDA-MB-231细胞的EMT过程,而FOXA2过表达逆转了NATD对EMT过程的诱导作用.结论:NATD通过控制FOXA2介导的EMT来促进乳腺癌转移.因此,靶向NATD/FOXA2轴可能是治疗乳腺癌的新策略.
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