【摘 要】
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为促进大豆NLP家族基因突变大豆材料的获得及大豆NIN和NLP基因功能的研究，本研究对大豆NIN和NLP基因进行生物信息学分析，通过CRISPR/Cas 9基因编辑技术构建基因敲除载体，并且通过大豆毛根转化实验验证靶点的有效性。结果表明：大豆基因组中一共存在4个NIN基因和10个NLP基因家族成员，这些基因都具有RWP-RK和PB1两个保守结构域。亚细胞定位预测表明所有成员都定位在细胞核中，此外G
【机 构】
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广州大学生命科学学院/分子遗传与进化创新研究中心
【基金项目】
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广东省基础与应用基础研究重大项目（2019B030302006）；
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为促进大豆NLP家族基因突变大豆材料的获得及大豆NIN和NLP基因功能的研究，本研究对大豆NIN和NLP基因进行生物信息学分析，通过CRISPR/Cas 9基因编辑技术构建基因敲除载体，并且通过大豆毛根转化实验验证靶点的有效性。结果表明：大豆基因组中一共存在4个NIN基因和10个NLP基因家族成员，这些基因都具有RWP-RK和PB1两个保守结构域。亚细胞定位预测表明所有成员都定位在细胞核中，此外GmNIN1b和GmNIN2a还定位于叶绿体。GmNIN1a/b、GmNIN2a/b、GmNLP2a/b及GmNLP3b在根瘤中的表达量相对较高，推测这些基因可能对结瘤过程具有重要的调控功能。成功构建了NLP4和NLP5两个敲除载体，得到可敲除GmNLP4a/b的3个有效靶点和敲除GmNLP5a/b的2个有效靶点。本研究获得了大豆NIN和NLP基因家族的生物信息学依据和创制GmNLP4a/b和GmNLP5a/b基因突变体的技术依据。
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