对比分析分离人脐带间充质干细胞（MSCs）常用方法的效果，筛选比较高效的分离方法。

采集足月剖宫产手术胎儿的脐带组织（n=15)，充分洗涤后去除3条脐血管及脐带外膜，将其剪碎至1 mm³的组织块，洗涤离心确定组织块的总体积，平均分为4组，分别采用组织块法和单纯胶原酶Ⅱ消化法、胶原酶Ⅱ+胰蛋白酶消化法、胶原酶Ⅱ+透明质酸酶消化法，分离获得人脐带MSCs，行锥虫蓝染色计数细胞；倒置相差显微镜观察细胞形态；使用免疫荧光染色检测细胞表面标志物CD105、CD90、CD73、CD31、CD44、CD45、人类白细胞抗原Ⅰ（HLA-Ⅰ）和人类白细胞抗原Ⅱ类分子（HLA-DR）的表达情况，进行细胞鉴定；噻唑蓝（MTT）法检测细胞的增殖曲线。

组织块法和单纯胶原酶Ⅱ消化法、胶原酶Ⅱ+胰蛋白酶消化法、胶原酶Ⅱ+透明质酸酶消化法4种方法均可分离获得干细胞，但获得细胞的数量和增殖能力不同。4种方法获得的细胞数量分别为（5.44±0.21）×10⁵、（4.03±0.24）×10⁵、（4.91±0.33）×10⁵和（5.94±0.40）×10⁵，胶原酶Ⅱ+透明质酸酶消化法显著多于其他3种方法，差异均有统计学意义（均P<0.05）。组织块法种植后第9~ 11天观察到细胞在组织块周围生长，而其他3种方法种植后第2天即可见贴壁生长的细胞。4种方法细胞达到90%~ 95%融合的时间分别为（18.5±3.5）、（8.0±1.0）、（7.5±1.5）、（3.5±0.5）d，胶原酶Ⅱ+透明质酸酶消化法显著短于其他3组，差异均有统计学意义（均P<0.05）。组织块法原代细胞的形态多为多角形，不规则，细胞的体积较大，单纯胶原酶Ⅱ消化法和胶原酶Ⅱ+胰蛋白酶消化法原代细胞的形态均较短小，而胶原酶Ⅱ+透明质酸酶消化法细胞形态呈细长的梭形。4种方法得到的细胞均阳性表达CD105、CD90和CD73，弱表达HLA-Ⅰ，不表达CD31、CD45和HLA-DR。胶原酶Ⅱ+透明质酸酶消化法细胞的增殖速率显著快于其他3种方法。

胶原酶Ⅱ+透明质酸酶消化法是一种高效的提取人脐带MSCs的方法。