【摘 要】
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目的 应用成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9(CRISPR/Cas9)系统构建KRAS基因敲低的人胰腺癌细胞株PANC-1并观察其细胞行为学变化.方法 设计合成靶向KRAS基因的小
【机 构】
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637000 四川南充,川北医学院医学影像四川省重点实验室;637000 四川南充,川北医学院基础医学院;637000 四川南充,川北医学院临床医学系
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目的 应用成簇的规律间隔的短回文重复序列及其相关蛋白9(CRISPR/Cas9)系统构建KRAS基因敲低的人胰腺癌细胞株PANC-1并观察其细胞行为学变化.方法 设计合成靶向KRAS基因的小向导RNA序列片段,体外转染构建KRAS基因敲低的PANC-1细胞.采用实时定量PCR和Western blot检测KRAS基因mRNA及蛋白表达,MTT细胞增殖实验、Transwell小室及流式细胞术分别检测KRAS基因敲低的PANC-1细胞的细胞增殖活性、细胞迁移能力及细胞内活性氧水平.结果 经测序验证,体外成功转染构建KRAS基因敲低的PANC-1细胞,KRAS基因mRNA及蛋白表达均降低,细胞增殖能力和细胞迁移能力减弱,细胞内活性氧水平升高(P＜0.05或P＜0.01).结论 采用CRISPR/Cas9系统成功构建KRAS基因敲低的PANC-1细胞,可为研究KRAS下游新功能基因在胰腺癌发生、发展中的作用提供帮助.
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