【摘 要】
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目的 探讨转染人吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)基因的胃癌细胞系的IDO表达与免疫逃逸的关系.方法 根据IDO基因编码序列,构建真核表达载体pIRES_2-EGFP-IDO,电转染胃癌BGC-823细胞,
【机 构】
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天津市肿瘤防治重点实验室,天津市肿瘤防治重点免疫室
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目的 探讨转染人吲哚胺2,3双加氧酶(IDO)基因的胃癌细胞系的IDO表达与免疫逃逸的关系.方法 根据IDO基因编码序列,构建真核表达载体pIRES_2-EGFP-IDO,电转染胃癌BGC-823细胞,用G418筛选稳定表达IDO细胞株.用RT-PCR和Western blot检测其IDO mRNA和IDO蛋白表达,测定培养上清中色氨酸和犬尿氨酸的水平.分离胃癌患者外周血T细胞,与转染细胞及加入1甲基色氨酸(1-MT)的细胞共孵育,检测对细胞毒性T淋巴细胞(CTL)和T细胞增殖的影响.结果 pIRES_2-EGFP-IDO真核载体经酶切验证并测序后证实连接成功.稳定表达IDO的BGC-823细胞IDO mRNA明显高于未转染组和对照组,并有IDO蛋白表达.转染组和未转染组色氨酸水平分别为(3.23±0.53)mg/L、(6.03±0.51)mg/L(t=13.32,P=0.000),犬尿氨酸浓度分别为(4.84±0.11)mg/L、(1.83±0.10)mg/L(t=42.916,P=0.000).转染IDO组、1-MT逆转组、转染空质粒组、BGC-823组之间对T淋巴细胞增殖抑制相比差异均有统计学意义(F=114.817,P=0.000),转染IDO组和1-MT逆转组抑制率明显高于转染空质粒组及BGC-823组,同时逆转组抑制率低于转染IDO组(P
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