泛素水解酶22在肝癌中的表达及siRNA沉默泛素水解酶22基因对肝癌细胞生长的影响

来源 :中华普通外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:languihe71
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目的 研究泛素水解酶22(ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase 22,USP22)基因在肝癌中的表达及沉默USP22基因对肝癌细胞的增殖活性、细胞凋亡和细胞周期的影响.方法 采用免疫组化检测58例肝细胞癌组织及相应癌旁组织中USP22蛋白的表达情况,采用RT-PCR和Western blot检测肝癌细胞中USP22的表达水平,并合成针对USP22基因的siRNA转染肝癌细胞;采用RTPCR检测和Western blot检测转染效率;MTF法测定细胞生长抑制率;流式细胞仪测定细胞凋亡率和细胞周期;免疫印迹检测CyclinD1、CDK4和CDK6蛋白表达水平.结果 发现USP22基因在肝癌组织及细胞中高表达;用针对USP22 siRNA干扰后,USP22表达水平明显降低;MTT法检测其细胞生长抑制率为42.24%,明显高于对照组(tsiUSP22组=22.47,P<0.01);流式细胞仪检测其细胞凋亡率为33.08% ±4.53%,明显高于对照组(tsiUSP22组=12.34,P<0.01);流式细胞仪检测细胞周期,发现其处于G1期细胞的百分比为68.81% ±2.71%,明显高于对照组(tsiUSP2组=33.91,P<0.01);Western blot检测发现细胞周期蛋白CyclinD1、CDK4和CDK6在USP22 siRNA组中的表达水平明显低于对照组(tCyclinD1=10.85,tCDK4=10.51,tCDK6=10.59,P<0.01). 结论 UPS22基因在肝癌组织及细胞中存在异常高表达,利用siRNA干扰UPS22表达,可抑制肝癌HepG3B细胞增殖活性,诱导其凋亡,并导致细胞周期被阻滞在G1期以内。

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