探讨乙肝病毒X蛋白(HBX)和炎症微环境M2巨噬细胞对肝癌细胞侵袭转移的影响。
方法HBX/LV5慢病毒转染Hep3B细胞后与人单核细胞系THP-1来源的M2巨噬细胞共培养，形成肝癌微环境模型。实验分2组：感染组(Hep3B＋、Hep3B＋＋M2)、非感染组(Hep3B－、Hep3B－＋LV5、Hep3B－＋LV5＋M2，、Hep3B－＋M2)。采用Western blot检测Hep3B细胞转染前后的上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)、上皮标志物(E-cadherin)和间叶标志物(N-cadherin)，用激光共聚焦显微镜观察E-cadherin和N-cadherin在Hep3B细胞的分子定位，通过transwell实验评价其侵袭转移能力。
结果HBX/LV5成功转染到Hep3B细胞内，并在细胞内稳定表达HBX蛋白(Hep3B＋)。Hep3B＋与M2共培养72 h后，经Western blot检测发现Hep3B＋E-cadherin表达(0.42±0.11)较Hep3B－(1.00±0.18)明显下调(t＝4.762，P<0.05)，N-cadherin表达(2.85±0.44)较Hep3B－(1.00±0.17)明显上调( t＝6.793，P<0.05)。Hep3B＋＋M2 E-cadherin(0.1±0.13)表达较Hep3B＋显著下调(t＝3.255，P<0.05)，N-cadherin表达(4.18±0.52)较Hep3B＋显著上调(t＝10.009，P<0.05)；非感染组EMT标记分子表达水平无明显变化；TransWell实验提示感染组侵袭转移能力显著提高。
结论乙型肝炎病毒HBX蛋白和M2巨噬细胞通过EMT机制共同介导肝癌细胞侵袭转移。