【摘 要】
：
为研制禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)亚单位疫苗,本研究对FAdV-4的Fiber-2蛋白在毕赤酵母中的发酵工艺进行了优化.首先根据酵母密码子偏好性优化Fiber-2基因,并且构建了重组真核表达载体pPIC9K-Fiber-2.将该质粒转化至毕赤酵母GS115菌株,经不同质量浓度G418筛选获得高拷贝重组菌.随后在摇瓶中进行诱导发酵时温度、时间和甲醇浓度的优化.用优化后的条件进行发酵表达并将上清液通过镍柱纯化得到了重组的Fiber-2蛋白.最后将蛋白与
【机 构】
：
天津科技大学生物工程学院,天津300222;北京市农林科学院畜牧兽医研究所,北京100097;北京市农林科学院畜牧兽医研究所,北京100097;扬州大学兽医学院,江苏扬州225009;扬州大学江苏省重
论文部分内容阅读
为研制禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV-4)亚单位疫苗,本研究对FAdV-4的Fiber-2蛋白在毕赤酵母中的发酵工艺进行了优化.首先根据酵母密码子偏好性优化Fiber-2基因,并且构建了重组真核表达载体pPIC9K-Fiber-2.将该质粒转化至毕赤酵母GS115菌株,经不同质量浓度G418筛选获得高拷贝重组菌.随后在摇瓶中进行诱导发酵时温度、时间和甲醇浓度的优化.用优化后的条件进行发酵表达并将上清液通过镍柱纯化得到了重组的Fiber-2蛋白.最后将蛋白与ISA-201-VG油佐剂混合并免疫21日龄SPF鸡进行免疫保护性试验.结果表明:在毕赤酵母中成功且高效的分泌表达了Fiber-2蛋白,分子量约为60 ku,在摇瓶发酵中诱导的最佳甲醇浓度、时间和温度分别为1.0％、72 h和30℃.优化后发酵液上清中的总蛋白量约为50 mg/L,重组Fiber-2蛋白达到8.7 mg/L.SDS-PAGE和Western blot结果表明采用镍柱对蛋白进行纯化可得到条带单一且具有良好免疫原性的重组Fiber-2蛋白.免疫保护性试验显示,由优化后的毕赤酵母表达Fiber-2蛋白制备的亚单位疫苗免疫雏鸡后,可以诱导较高的抗体水平并提供高达100％的超强FAdV-4毒株(GD616)的攻击保护.本研究为进一步采用毕赤酵母表达的重组Fiber-2蛋白制备FAdV-4亚单位疫苗的研发奠定了基础.
其他文献
为了解生物滤池/滴滤池在净化含NH3废气过程中N2O排放情况并分析其影响因素.本研究依据Web of Science数据库检索发表于2006-2020年的国内外相关文献报道,并进行归纳总结和数据分析.结果表明:在生物滤池中,填料湿度、填料pH、NH3进气载荷等对N2O排放有着重要影响;在滴滤池中,进气气体组分、NH3进气载荷和滴滤池构造等影响N2O排放.总体而言,生物滤池/滴滤池相关的N2O排放机理尚不清晰,仍需进一步研究.最后,结合生物滤池/滴滤池运行管理的研究成果,本研究就N2O减排提出建议.
针对目前生猪目标检测算法模型较大,实时性差导致其难以在移动终端中应用等问题,将一种改进的轻量化YOLOv4算法用于生猪目标检测.在群养猪环境下以不同视角和不同遮挡程度拍摄生猪图像,建立生猪目标检测数据集.基于轻量化思想,在YOLOv4基础上缩减模型大小.结果表明,本研究算法的准确率和召回率分别为96.85％和91.75％,检测速度为62帧/s,相比于原模型,本研究算法在不损失精度的情况下,将模型大小压缩了80％,检测速度提高了 11帧/s.本研究算法具有轻量化,稳健性强,实时性好的优点,能够更好地实现实际
为给西北荒漠绿洲区紫花苜蓿测土施肥奠定科学基础,本研究采用“零散实验数据整合法”和“养分平衡-地力差减法”,对该自然区域紫花苜蓿土壤氮素丰缺指标和推荐施氮量进行了研究.结果表明:西北荒漠绿洲区生长第1年紫花苜蓿土壤碱解氮第1～7级丰缺指标为≥77、57～77、42～57、31～42、23～31、17～23和＜17 mg/kg,土壤有机质第1～7级丰缺指标为≥15、9～15、5～9、3～5、2～3、1～2和＜1 g/kg;生长第2年及以上紫花苜蓿土壤碱解氮第1～5级丰缺指标为≥74、40～74、22～40、
[目的]探讨不同生长速度鸡品种(配套系)线粒体DNA D-loop区全序列遗传多样性和起源特性,为肉鸡品种选育和溯源提供理论依据.[方法]以不同生长速度的8个黄羽肉鸡配套系(中快速型5个、慢速型3个)、2个地方鸡种(固始鸡、藏鸡)、2个引进鸡种(隐性白羽鸡、安卡鸡)、1个白羽肉鸡(罗斯308)、817杂交肉鸡以及1个高产蛋鸡配套系(大午褐壳蛋鸡)共计15个鸡种为研究对象,采集血液提取DNA后进行PCR扩增,对15个鸡种共683个个体mtDNA D-loop区全序列进行测序,使用DnaSP 5.10软件分析
为比较集装箱式与池塘养殖草鱼鱼肉的食用品质差异,以蒸煮得率、色泽、三磷酸腺苷关联物含量、模拟消化后相对分子质量分布为指标,研究2种养殖方式草鱼生、熟状态下的品质差异;利用感官评价、电子鼻和固相微萃取-气相色谱-质谱分析技术,研究2种养殖方式草鱼在生、熟状态下的气味及挥发性风味物质组成差异.结果表明:1)集装箱式养殖和池塘养殖草鱼的蒸煮得率分别为78.59％和85.62％,集装箱式养殖草鱼的蒸煮得率显著(P＜0.05)低于池塘养殖草鱼;2)集装箱式养殖生草鱼的亮度值显著(P＜0.05)低于池塘养殖草鱼,但经
为解决养猪生产中传统发情鉴定法工作量大、准确率低等问题,本研究以经产大白母猪为研究对象,将发情周期分为发情前3天(PE),发情期(E)和发情后3天(AE)3个阶段,分别收集口腔中唾液,提取唾液蛋白,使用Lable-free定量蛋白组学技术对3个阶段的唾液蛋白组进行质谱检测,并通过蛋白质组学定性定量软件Maxquant进行分析.结果显示:1)3个阶段共鉴定到405个蛋白质,包括149个共有蛋白和160个特异蛋白,其中有45个共有蛋白差异达到显著水平(P＜0.05),PE、E和AE 3个阶段分别有54、25和
为了解新疆不同动物源粪肠球菌的耐药性和耐药基因携带情况,并指导临床针对不同动物合理用药,从新疆9个县区养殖场分别采集猪、牛、羊、骆驼、鸡和鸽的粪样共564份,进行粪肠球菌的分离鉴定.对分离得到的粪肠球菌采用CLSI推荐的琼脂稀释法进行11种抗菌药物最小抑菌浓度的测定,用PCR方法进行10种耐药基因的检测.结果显示:1)从不同动物中共分离得到242株粪肠球菌,分离率从高到低依次为鸡(95.2％,40/42)、猪(61.1％,55/90)、牛(35.9％,55/153)、羊(34.5％,38/110)、鸽(3
为分析早期断奶对沂蒙黑山羊羔羊生长性能、盲肠短链脂肪酸含量和菌群多样性影响,选用0d沂蒙黑山羊羔羊36只,分为2组,对照组和试验组,每组18只羔羊.母乳组(B组)羔羊哺喂母乳,代乳粉组(R组)于8 d起断奶,10 d完全哺喂代乳粉,15 d开始两组均饲喂开食料.在8、10、15、25、45和75 d时每组随机屠宰3头羊并收集盲肠内容物,采用GC-MS检测方法分析短链脂肪酸含量以及高通量测序技术分析菌群多样性.结果表明:1)15 d时R组羔羊体重极显著低于B组(P＜0.01),而75 d时显著高于B组(P＜
为探讨桃不同品种的抗寒性,给我国北方地区桃品种选择提供科学依据,以12个桃品种的一年生枝条为材料,研究低温胁迫(-10、-15、-20、-25、-30、-35和-40℃)对相对电导率(REC)、发芽率、束缚水/自由水、丙二醛(MDA)质量摩尔浓度、可溶性糖、可溶性蛋白和脯氨酸质量分数的影响,并运用隶属函数法对其抗寒性进行综合评价.结果表明:随胁迫温度的降低,12个桃品种枝条的REC变化趋势呈“S”形,半致死温度(LT50)介于-24.30～-17.88℃;发芽率呈逐渐下降的趋势;束缚水/自由水、丙二醛质量
针对轮式拖拉机自动导航中转向角测量及自动控制的需求,研制由非接触式角度传感器为测量元件的轮式拖拉机转向角测量装置.该转向角测量装置由转向角检测机构、数据采集模块及显示终端组成.角度传感器相对车体静止,磁块随前轮转向立柱一起做旋转运动,磁场方向的变化使角度传感器输出不同的电压值,从而测量前轮的转动角度.数据采集模块采用AD转换和数值标度变换方法实时采集并处理角度传感器输出的模拟电压信号,将结果发送至显示终端.在转向角测量试验过程中,根据RTK-GNSS记录的拖拉机行驶轨迹计算实际转向角度,并与所设计的转向角