【摘 要】
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用钙离子报告基因非侵入式监测细胞内源钙离子实时变化是目前比较常用的钙离子监测方法。而基于传统荧光共振能量转移原理（FRET）的荧光探针具有较高的量子产率,则是目前应用于细胞或亚细胞水平钙离子检测的重要备选实验方案之一。然而,供体荧光基团的激发过程却经常给最终成像过程带来强的背景和荧光信号光漂白等干扰。水母发光蛋白（Aequorin）能够在底物存在的情况下和3个Ca2+结合,通过氧化还原反应产生一个
【机 构】
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西北大学生命科学学院/陕西省生物技术重点实验室/西部资源与现代生物技术省部共建教育部重点实验室
【基金项目】
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国家自然科学基金（31470329,31200091）； 西部地区生物资源与生物技术教育部重点实验室科学研究项目（ZS14010）； 留学人员科技活动项目择优资助基金（DBL14003）； 陕西省重点实验室科研计划项目（17JS127）共同资助；
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用钙离子报告基因非侵入式监测细胞内源钙离子实时变化是目前比较常用的钙离子监测方法。而基于传统荧光共振能量转移原理（FRET）的荧光探针具有较高的量子产率,则是目前应用于细胞或亚细胞水平钙离子检测的重要备选实验方案之一。然而,供体荧光基团的激发过程却经常给最终成像过程带来强的背景和荧光信号光漂白等干扰。水母发光蛋白（Aequorin）能够在底物存在的情况下和3个Ca2+结合,通过氧化还原反应产生一个波长为469 nm的蓝光光量子,借助这一反应中蓝光光量子的产率与细胞中游离Ca2+浓度间存在精确定量关系,研究者可以准确测量细胞内的钙离子浓度动态变化情况。但是由于蓝光的波长短,存在易于被散射而难于被检测等问题,造成了目前直接使用水母发光蛋白检测细胞内Ca2+动态时,实验效率较低。为了解决上述这些问题,我们构建了一种将apoaequorin-egfp基因融合表达的植物双元表达载体,然后通过农杆菌介导的遗传转化法将这个融合基因整合到烟草的基因组中,建立了一个基于生物发光共振能量转移技术（BRET）技术,较为高效的植物细胞内源钙离子动态检测系统。
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