【摘 要】
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目的 通过利用氯化锰刺激SN4741细胞(小鼠多巴胺能细胞),构建体外锰暴露模型,研究自噬紊乱在锰中毒中的作用,并初步探讨机制.方法 向SN4741细胞培养基中加入400 μmol/L的氯
【机 构】
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空军军医大学,陕西西安710032
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目的 通过利用氯化锰刺激SN4741细胞(小鼠多巴胺能细胞),构建体外锰暴露模型,研究自噬紊乱在锰中毒中的作用,并初步探讨机制.方法 向SN4741细胞培养基中加入400 μmol/L的氯化锰溶液,检测细胞活力通过CCK-8(Cell Counting Kit-8,CCK-8)试剂盒,分别检测锰作用0h～48 h的细胞活力;凋亡蛋白Caspase-3和PARP,自噬相关蛋白Atg5和LC3的蛋白表达水平采用蛋白印迹法(western blot)检测;3-MA作为实验干预组抑制自噬紊乱,之后检测上述细胞自噬蛋白水平和损伤指标,采用方差分析进行比较.结果 锰刺激48 h后损伤SN4721细胞活力(t=47.42,P=0.0013),凋亡标志蛋白Caspase-3剪切增加,下游分子PARP的剪切水平升高(t=11.96,P=0.019);Atg5和LC3-Ⅱ蛋白表达在锰暴露24 h有所升高,48 h升高更明显(t=18.72,P=0.012);3-MA干预后降低锰对SN4741细胞损伤(t=3.92,P=0.045),且3-MA干预致Atg5水平下降,Caspase-3蛋白和PARP等标志凋亡的蛋白水平降低(t=10.21,P=0.016).结论 锰暴露可诱导多巴胺神经元自噬功能异常,继而诱导细胞凋亡,抑制自噬能减少锰暴露引起的细胞凋亡.
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