【摘 要】
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目的:探讨抗血小板整合素β3抗体对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）的损伤及其相关机制。方法:收集36例慢性免疫性血小板减少症患者的血清,通过流式细胞术和单克隆抗体特异性俘获血小板抗原技术（MAIPA）筛选出含抗整合素β3抗体的患者血清。用抗整合素β3血清处理HUVEC后,乳酸脱氢酶（LDH）活性测定法检测HUVEC损伤情况,流式细胞术检测HUVEC凋亡情况,逆转录实时荧光定量PCR（RT-q P
【机 构】
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锦州医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室
【基金项目】
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国家自然科学基金（NO.81370619）； 国家重点基础研究发展计划（973计划）项目（2015CB554403）；
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目的:探讨抗血小板整合素β3抗体对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）的损伤及其相关机制。方法:收集36例慢性免疫性血小板减少症患者的血清,通过流式细胞术和单克隆抗体特异性俘获血小板抗原技术（MAIPA）筛选出含抗整合素β3抗体的患者血清。用抗整合素β3血清处理HUVEC后,乳酸脱氢酶（LDH）活性测定法检测HUVEC损伤情况,流式细胞术检测HUVEC凋亡情况,逆转录实时荧光定量PCR（RT-q PCR）检测HUVEC凋亡相关基因Bax表达情况,Western blot检测细胞凋亡相关信号通路蛋白Akt和相关蛋白Bax的表达情况。用抗整合素β3血清结合Akt激活剂SC79处理HUVEC后,LDH活性测定法检测HUVEC损伤情况,流式细胞术检测HUVEC的凋亡情况,RT-q PCR检测HUVEC凋亡相关基因Bax的表达情况。结果:从36份患者血清中筛选出5份含抗整合素β3抗体血清,用这些血清处理HUVEC后,细胞外LDH活性增加（P ＜0.05）,细胞凋亡比例增加（P ＜0.05）,Bax蛋白和mRNA表达水平上调（P ＜0.05）,p Akt蛋白表达下调（P ＜0.05）。抗整合素β3血清结合SC79处理HUVEC后,与单独使用抗整合素β3血清处理组相比,细胞外LDH活性显著降低（P ＜0.05）,HUVEC凋亡比例显著下降（P ＜0.05）,Bax基因表达下降（P ＜0.05）。结论:抗整合素β3抗体在体外能够引起HUVEC的损伤和凋亡,其作用机制可能与抑制Akt信号通路有关,且Akt激活剂SC79能够在体外抑制抗整合素β3抗体引起的HUVEC损伤和凋亡。
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