【摘 要】
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目的 探讨婆罗双树样基因4(SALL4)对人卵巢癌SKOV-3细胞裸鼠皮下移植瘤生长的影响及可能机制.方法 通过SALL4短发夹RNA(shRNA)慢病毒感染构建稳定低表达SALL4基因的SKOV-3细胞株,分为对照组(blank)、载体组(NC shRNA)和干扰组(SALL4 shRNA);采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测各组细胞SALL4 mRNA和蛋白的表达水平.15只雄性BALB/c裸鼠按随机数字法分成3组,每组5只.将各组细胞经右前肢皮下注射建立裸鼠皮下移植瘤模型,根据注射的细胞类别将裸鼠
【机 构】
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南华大学附属南华医院妇产科,湖南 衡阳 421002;南华大学附属第二医院产科,湖南 衡阳 421001;衡阳市妇幼保健院妇产科,湖南 衡阳 421009
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目的 探讨婆罗双树样基因4(SALL4)对人卵巢癌SKOV-3细胞裸鼠皮下移植瘤生长的影响及可能机制.方法 通过SALL4短发夹RNA(shRNA)慢病毒感染构建稳定低表达SALL4基因的SKOV-3细胞株,分为对照组(blank)、载体组(NC shRNA)和干扰组(SALL4 shRNA);采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测各组细胞SALL4 mRNA和蛋白的表达水平.15只雄性BALB/c裸鼠按随机数字法分成3组,每组5只.将各组细胞经右前肢皮下注射建立裸鼠皮下移植瘤模型,根据注射的细胞类别将裸鼠分为对照组(blank,注射SKOV-3细胞)、载体组(NC shRNA,注射NC shRNA干预的SKOV-3细胞)和干扰组(SALL4 shRNA,注射SALL4 shRNA干预的SKOV-3细胞);监测肿瘤生长情况,并绘制肿瘤生长曲线;采用qRT-PCR法检测各组裸鼠移植瘤组织中SALL4 mRNA的表达水平;TUNEL染色观察各组裸鼠移植瘤组织中细胞凋亡情况;免疫组化法观察移植瘤组织中Ki-67的表达水平;蛋白质印迹法检测各组移植瘤组织中SALL4蛋白、凋亡蛋白cleaved caspase-3以及Wnt/β-catenin通路相关蛋白β-catenin、c-Myc和cyclin D1的表达水平.结果 SALL4 shRNA慢病毒感染后,SKOV-3细胞中SALL4 mRNA和蛋白表达水平降低,差异有统计学意义,FmRNA=370.032,F蛋白=81.414,均P<0.001.与对照组〔(2.13±0.17)g、(1162.00±62.42)mm3〕和载体组〔(1.98±0.25)g、(1020.00±69.28)mm3〕比较,SALL4干扰组〔(0.77±0.11)g、(560.40±70.77)mm3〕移植瘤质量和体积均降低,差异有统计学意义,F瘤质量=80.584,F体积=33.271,均P<0.001;同时,与对照组〔(11.58±1.73)％、0.08±0.04〕和载体组〔(14.62±1.36)％、0.07±0.08〕比较,SALL4干扰组〔(56.84±4.48)％、0.87±0.12〕移植瘤组织细胞凋亡率以及cleaved caspase-3蛋白表达水平增加,差异有统计学意义(F值分别为254.180、759.081,均P<0.001),而与对照组〔(78.66±2.21)％、0.89±0.06、0.20±0.05、0.24±0.04〕和载体组〔(74.82±3.07)％、0.82±0.08、0.19±0.02、0.22±0.05〕比较,SALL4干扰组〔(17.15±0.82)％、0.31±0.04、0.07±0.01、0.08±0.02〕移植瘤中Ki-67蛋白阳性率以及β-catenin、c-Myc和cyclin D1蛋白表达水平降低,差异有统计学意义,F值分别为476.086、616.622、67.286和106.588,均P<0.001.结论 干扰SALL4表达可有效抑制人卵巢癌SKOV-3细胞裸鼠皮下移植瘤的生长,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路活性有关.
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