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摘要：目的 建立测定健步丸中芍药苷的分析方法。方法 采用Kromasil C18色谱柱；流动相为乙腈-0.5%三乙胺水溶液梯度洗脱，检测波长230nm；流速 1.0mL•min-1 。结果 芍药苷在：21.28～170.24μg•mL-1的范围内线性关系良好，平均回收率为97.08%。结论 本法简便、准确、重现性好，可用于健步丸中芍药苷的测定。
关键词：HPLC 健步丸 芍药苷
中图分类号：R284 文献标识码：B 文章编号：1004-7484（2011）18-0173-02
健步丸由白芍等十味中藥组成。具有补肝肾，强筋骨的作用，主治腰膝酸软，步履艰难等症。白芍具抗菌养血作用，指标成分为芍药苷。为控制健步丸的质量，本文采用HPLC对方中白芍指标成分芍药苷进行测定，结果表明该方法简便、灵敏、准确，重现性好。
1 仪器与试剂
Agilent 1200高效液相分析仪；METTLER XS205电子分析天平；KQ-500B型超声波清洗器万能粉碎机；芍药苷对照品（中检所，批号：110836-200721），健步丸（兰州太宝制药），白芍为市售药材，甲醇、乙腈为色谱纯；实验室用水为超纯水；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Kromasil C18柱；流动相：A为乙腈，B为0.5%三乙胺水溶液；洗脱梯度程序：A：20%/0～5mins；A：20%～50%/5～20mins；流速1mL•min-1；检测波长230nm；柱温30℃；进样量20μL。样品溶液中各组分基线分离；阴性对照无干扰，证明此色谱条件可行。对照品溶液、样品溶液及阴性溶液的色谱图见图1。
样品
白芍阴性对照
芍药苷对照品
图1 健步丸色谱图
2.2 实验溶液制备
2.2.1 对照品溶液：精密称称取芍药苷21.28 mg，置20ml量瓶中，加50％甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配成对照品
溶液储备液。分别精密吸取上述储备液适量至20ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，得63.84μg•ml-1的芍药苷对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液：取本品0.6g研细，精密称定，置50ml量瓶中，加50%甲醇溶液10ml，超声30min，放冷，摇匀，微孔滤膜（0.45μm）滤过，得供试品溶液。
2.2.3 阴性对照溶液：取处方量的药材，按制备工艺制备缺白芍的阴性样品，按供试品溶液制备方法，得阴性对照溶液。
2.3 结果
2.3.1 线性试验：精密吸取芍药苷对照品储备液0.2，0.4，0.5，0.8，1.6 ml，分别置10ml量瓶中用50%甲醇稀释至刻度，制成对照品溶液，在“2.1”项下进样，以峰面积Y为纵坐标，对照品溶液浓度X为横坐标，进行线性回归，线性方程：Y=26083.1480X-77.9274（r=0.999），线性范围21.28～170.24ug/ml。
2.3.2 精密度试验：精密吸取同一混合对照品溶液20 μL，在“2.1”项下重复进样5次测定，其RSD分别为0.15%（n=5），精密度良好。
2.3.3 重复性试验：精密称取同一批样品5份，按供试品溶液处理方法制备样品溶液，在“2.1”项下进样测定5次，分别计算芍药苷的含量，其RSD为1.60%。
2.3.4 稳定性试验：供试品溶液室温贮存，在“2.1”项下，分别于0、2、4、6、8h进样测定一次，RSD为1.34%，样品在8h内稳定。
2.3.5 回收率试验：精密称取批号为091001的样品5份，置10ml量瓶中，精密加入芍药苷对照品溶液0.6ml，按2.2.2项下方法配制，依法测定，结果平均回收率为97.08% RSD为3.31% 测定结果见表1。
表1 回收率测定结果
成分 样品取样量/g 样品成分含量/mg 加入量/mg 测得总量/mg 回收率/% 平均回收率/% RSD/%
0.3169 1.6778 0.6384 2.3388 101.35
0.3087 1.6344 0.6384 2.1864 94.71
芍药苷 0.2991 1.5836 0.6384 2.1192 93.51 97.08 3.31
0.2953 1.5634 0.6384 2.1492 96.64
0.3058 1.6190 0.6384 2.2445 99.20
2.3.6含量测定：取3批样品，按供试品溶液制备方法配制，依“2.1”项下测定， 计算芍药苷含量见表2。
表2 含量测定结果
批号 090302 090206 091001
芍药苷（mg/g） 5.21 5.23 5.28
3 讨论
提取条件的选择：比较超声、回流、静置结果表明超声和回流方法提取含量相近，故选择较简便的超声作为提取方法。
本实验选择乙腈-0.5%三乙胺水溶液（磷酸调pH3.0）梯度洗脱，芍药苷在6～7分钟之间出峰，其他杂质峰在35分钟之内全部出完，与杂质峰能够达到基线分离，方法简单可靠。
参考文献
[1] 国家药典委员会.卫生部药品标准.中药成方制剂第十三册［S］.北京:化学工业出版社,1997:132.
关键词：HPLC 健步丸 芍药苷
中图分类号：R284 文献标识码：B 文章编号：1004-7484（2011）18-0173-02
健步丸由白芍等十味中藥组成。具有补肝肾，强筋骨的作用，主治腰膝酸软，步履艰难等症。白芍具抗菌养血作用，指标成分为芍药苷。为控制健步丸的质量，本文采用HPLC对方中白芍指标成分芍药苷进行测定，结果表明该方法简便、灵敏、准确，重现性好。
1 仪器与试剂
Agilent 1200高效液相分析仪；METTLER XS205电子分析天平；KQ-500B型超声波清洗器万能粉碎机；芍药苷对照品（中检所，批号：110836-200721），健步丸（兰州太宝制药），白芍为市售药材，甲醇、乙腈为色谱纯；实验室用水为超纯水；其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Kromasil C18柱；流动相：A为乙腈，B为0.5%三乙胺水溶液；洗脱梯度程序：A：20%/0～5mins；A：20%～50%/5～20mins；流速1mL•min-1；检测波长230nm；柱温30℃；进样量20μL。样品溶液中各组分基线分离；阴性对照无干扰，证明此色谱条件可行。对照品溶液、样品溶液及阴性溶液的色谱图见图1。
样品
白芍阴性对照
芍药苷对照品
图1 健步丸色谱图
2.2 实验溶液制备
2.2.1 对照品溶液：精密称称取芍药苷21.28 mg，置20ml量瓶中，加50％甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，配成对照品
溶液储备液。分别精密吸取上述储备液适量至20ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，得63.84μg•ml-1的芍药苷对照品溶液。
2.2.2 供试品溶液：取本品0.6g研细，精密称定，置50ml量瓶中，加50%甲醇溶液10ml，超声30min，放冷，摇匀，微孔滤膜（0.45μm）滤过，得供试品溶液。
2.2.3 阴性对照溶液：取处方量的药材，按制备工艺制备缺白芍的阴性样品，按供试品溶液制备方法，得阴性对照溶液。
2.3 结果
2.3.1 线性试验：精密吸取芍药苷对照品储备液0.2，0.4，0.5，0.8，1.6 ml，分别置10ml量瓶中用50%甲醇稀释至刻度，制成对照品溶液，在“2.1”项下进样，以峰面积Y为纵坐标，对照品溶液浓度X为横坐标，进行线性回归，线性方程：Y=26083.1480X-77.9274（r=0.999），线性范围21.28～170.24ug/ml。
2.3.2 精密度试验：精密吸取同一混合对照品溶液20 μL，在“2.1”项下重复进样5次测定，其RSD分别为0.15%（n=5），精密度良好。
2.3.3 重复性试验：精密称取同一批样品5份，按供试品溶液处理方法制备样品溶液，在“2.1”项下进样测定5次，分别计算芍药苷的含量，其RSD为1.60%。
2.3.4 稳定性试验：供试品溶液室温贮存，在“2.1”项下，分别于0、2、4、6、8h进样测定一次，RSD为1.34%，样品在8h内稳定。
2.3.5 回收率试验：精密称取批号为091001的样品5份，置10ml量瓶中，精密加入芍药苷对照品溶液0.6ml，按2.2.2项下方法配制，依法测定，结果平均回收率为97.08% RSD为3.31% 测定结果见表1。
表1 回收率测定结果
成分 样品取样量/g 样品成分含量/mg 加入量/mg 测得总量/mg 回收率/% 平均回收率/% RSD/%
0.3169 1.6778 0.6384 2.3388 101.35
0.3087 1.6344 0.6384 2.1864 94.71
芍药苷 0.2991 1.5836 0.6384 2.1192 93.51 97.08 3.31
0.2953 1.5634 0.6384 2.1492 96.64
0.3058 1.6190 0.6384 2.2445 99.20
2.3.6含量测定：取3批样品，按供试品溶液制备方法配制，依“2.1”项下测定， 计算芍药苷含量见表2。
表2 含量测定结果
批号 090302 090206 091001
芍药苷（mg/g） 5.21 5.23 5.28
3 讨论
提取条件的选择：比较超声、回流、静置结果表明超声和回流方法提取含量相近，故选择较简便的超声作为提取方法。
本实验选择乙腈-0.5%三乙胺水溶液（磷酸调pH3.0）梯度洗脱，芍药苷在6～7分钟之间出峰，其他杂质峰在35分钟之内全部出完，与杂质峰能够达到基线分离，方法简单可靠。
参考文献
[1] 国家药典委员会.卫生部药品标准.中药成方制剂第十三册［S］.北京:化学工业出版社,1997:132.