【摘 要】
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目的 探讨金丝桃苷对脂多糖(LPS)诱导的人肺泡上皮细胞(HPAEpiC)的影响及分子机制.方法 将HPAEpiC分为对照组、模型组、金丝桃苷低、中、高剂量药物组、anti-miR-NC组、anti-miR-199a组、高剂量药物组+miR-NC组、高剂量药物组+miR-199a组.四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测m
【机 构】
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濮阳市安阳地区医院呼吸与危重症医学科,河南 安阳455000;新疆维吾尔自治区人民医院呼吸内科,新疆维吾尔自治区 乌鲁木齐830002
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目的 探讨金丝桃苷对脂多糖(LPS)诱导的人肺泡上皮细胞(HPAEpiC)的影响及分子机制.方法 将HPAEpiC分为对照组、模型组、金丝桃苷低、中、高剂量药物组、anti-miR-NC组、anti-miR-199a组、高剂量药物组+miR-NC组、高剂量药物组+miR-199a组.四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测miR-199a表达水平;蛋白质印迹(Western blotting)法检测裂解的半胱天冬蛋白酶3(Cleaved-caspase3)、半胱天冬蛋白酶3前体(pro-caspase3)的蛋白表达.结果 金丝桃苷处理后,LPS诱导的HPAEpiC中细胞OD值升高,金丝桃苷低、中、高剂量药物组OD值分别为(0.49±0.02)、(0.60±0.03)、(0.72±0.03),G0/G1期细胞所占比例降低,S期细胞所占比例升高,细胞凋亡率降低,TNF-α、IL-1β水平降低,miR-199a表达水平降低,Cleaved-caspase3表达水平降低,pro-caspase3表达水平升高,且呈剂量依赖性(P<0.05);抑制miR-199a表达可抑制LPS诱导的HPAEpiC细胞凋亡和炎症因子的释放.且miR-199a过表达逆转了金丝桃苷提取物对LPS诱导的HPAEpiC细胞凋亡和炎症因子的作用.结论 金丝桃苷可能通过下调miR-199a抑制LPS诱导的HPAEpiC细胞凋亡和炎症反应.
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