【摘 要】
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目的 探讨微小RNA-301(miR-301)在胃癌的上皮间充质转化(EMT)过程中发挥的作用及分子机制.方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测2019-01-01—2019-12-31在河北医科大学第四医院胃肠外科行手术治疗的72例新鲜胃癌及癌旁组织(距癌周≥3 cm)中miR-301的表达水平,分析miR-301表达与患者临床病理参数之间的关系.qRT-PCR检测miR-301在人胃癌细胞株SGC7901、AGS、MGC803及正常胃上皮细胞株GES-1中的表达.CCK-8检测转染后MGC8
【机 构】
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河北医科大学第四医院外三科,河北 石家庄050019
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目的 探讨微小RNA-301(miR-301)在胃癌的上皮间充质转化(EMT)过程中发挥的作用及分子机制.方法 实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测2019-01-01—2019-12-31在河北医科大学第四医院胃肠外科行手术治疗的72例新鲜胃癌及癌旁组织(距癌周≥3 cm)中miR-301的表达水平,分析miR-301表达与患者临床病理参数之间的关系.qRT-PCR检测miR-301在人胃癌细胞株SGC7901、AGS、MGC803及正常胃上皮细胞株GES-1中的表达.CCK-8检测转染后MGC803细胞活性的变化;划痕实验、Transwell小室实验检测转染后MGC803迁移侵袭能力的改变;实时荧光定量多聚酶链反应(real time PCR)和蛋白质印迹法检测抑制miR-301后EMT标志物的变化;应用生物信息学技术及双荧光素酶报告基因分析检测miR-301直接调控的基因.结果 胃癌组织中miR-301水平(5.012±2.510)高于癌旁组织(1.009±0.448),t=13.322,P<0.001.miR-301表达与胃癌的淋巴结转移及临床TNM分期有关,t值分别为-2.964和-3.067,P值分别为0.004和0.003.胃癌细胞株的miR-301水平高于GES-1,其中MGC803最高,F=41.361,P<0.001;抑制物转染MGC803细胞后细胞的活性(0.543±0.077)低于对照组(1.106±0.114),t=-10.025,P<0.001;miR-301 inhibitors转染后MGC803细胞迁移和侵袭能力也下降,t值分别为12.518和10.476,均P<0.001;miR-301抑制物(inhibitors)转染后MGC803细胞EMT相关基因N-钙粘蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达降低,而E-cadherin的表达增高,上述指标间差异均有统计学意义;荧光素酶报告基因分析显示,miR-301可直接抑制NKIRAS2的表达.结论 miR-301促进了胃癌的进展转移,其机制可能与miR-301抑制NKIRAS2,进而影响肿瘤EMT有关.
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