miR-1271-5p在胃癌组织及细胞系中的表达及作用机制研究

来源 :广西医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:sunman511
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目的:胃癌(GC)是世界范围内常见的恶性肿瘤。在我国,胃癌的发病率和死亡率持续居高,严重威胁着人们的生命和健康。为此,对用于明确诊断胃癌和有效治疗目标的生物标记物的研究已成为迫切需要解决的热点。miR-1271-5p在多种肿瘤中异常表达,本研究旨在探讨miR-1271-5p在胃癌中的表达及其临床意义、对胃癌细胞生物学行为的影响及其作用机制。方法:1.qRT-PCR检测90例胃癌及对应的癌旁组织和胃细胞系中miR-1271-5p的表达。结合患者临床信息分析miR-1271-5p与患者临床病理及生存时间的关系。2.在胃癌SGC-7901,MGC-803和AGS细胞中分别用miR-1271-5p mimics或miR-1271-5p inhibitor转染,以过表达或抑制其表达,并通过q RT-PCR技术进行验证其过表达或抑制效果。流式细胞术检测细胞周期分布和细胞凋亡情况;CCK8法检测细胞增殖活性;划痕愈合试验、Transwell迁移试验检测细胞迁移能力;Transwell侵袭试验检测细胞侵袭能力,用以阐明miR-1271-5p对胃癌细胞生物学行为的影响。3.在胃癌SGC-7901、MGC-803和AGS细胞中转染miR-1271-5p mimics或miR-1271-5p inhibitor过表达或敲低miR-1271-5p。用Targetscan在线网站(http://www.targetscan.org)预测miR-1271-5p靶基因,从中筛选出表达受到miR-1271-5p负性调控的蛋白,并用q RT-PCR、Western blot和细胞免疫荧光方法进行验证。在30对胃癌患者的肿瘤及对应癌旁样本中验证miR-1271-5p和靶基因表达的相关性。明确miR-1271-5p通过靶基因发挥的抑癌作用。结果:1.相对于正常胃上皮细胞GES1,胃癌SGC-7901、MGC-803、AGS细胞中miR-1271-5p的表达均降低(GES1:1.001±0.002 vs SGC7901:0.323±0.003,MGC803:0.124±0.007,AGS:0.102±0.010,均P<0.001);胃癌组织miR-1271-5p表达量明显低于其配对癌旁组织(2.544±0.209 vs4.427±0.339,P<0.001)。胃癌组织中miR-1271-5p的表达水平与TNM分期呈显著负相关(P=0.028)且miR-1271-5p高表达者生存期延长,低表达者生存期缩短(42个月vs 36个月,P<0.05)。2.转染miR-1271-5p mimics后,SGC-7901、MGC-803和AGS细胞的细胞增殖活力、划痕愈合率(P<0.001,P<0.001,P=0.001)及Transwell迁移(P=0.003,P<0.001,P<0.001)及侵袭细胞数(P=0.001,P<0.001,P<0.001)显著低于转染mimics.NC的细胞;相反,转染miR-1271-5p inhibitor抑制其表达后,细胞增殖活力、划痕愈合率(P<0.001,P=0.002,P<0.001)及Transwell迁移(P<0.001,P<0.001,P<0.001)及侵袭细胞数(P<0.001,P<0.001,P<0.001)显著高于转染inhibitor.NC的细胞。转染miR-1271-5p mimics的SGC-7901、MGC-803和AGS细胞中凋亡细胞所占百分比(P=0.015,P=0.047,P=0.020)及处于G2/M期的细胞所占百分比(P=0.004,P=0.004,P=0.022),显著高于转染mimics.NC的细胞;相反,转染miR-1271-5p inhibitor后,与转染inhibitor.NC的对照组相比,细胞中凋亡细胞所占百分比(P=0.002,P=0.006,P=0.018)及处于G2/M期的细胞所占百分比(P=0.025,P=0.033,P=0.085)显著下降。转染miR-1271-5p mimics后,SGC-7901、MGC-803和AGS细胞上皮-间质转化能力显著低于转染mimics.NC的细胞;相反,转染miR-1271-5p inhibitor后,与转染inhibitor.NC的对照组相比,上皮-间质转化能力显著提升。3.在胃癌SGC-7901、MGC-803和AGS细胞中转染miR-1271-5p mimics或miR-1271-5p inhibitor过表达或敲低miR-1271-5p。用Targetscan在线网站(http://www.targetscan.org)预测miR-1271-5p靶基因,从中筛选出表达受到miR-1271-5p负性调控的蛋白,并用q RT-PCR、Western blot和细胞免疫荧光方法进行验证。在30例胃癌患者的肿瘤及对应癌旁样本中验证miR-1271-5p和靶基因表达的相关性。明确miR-1271-5p通过靶基因发挥的抑癌作用。小结:1.胃癌组织及细胞系中miR-1271-5p表达均下调且与患者TNM分期呈负相关,和患者生存时间呈正相关。2.miR-1271-5p过表达可抑制胃癌细胞增殖、迁移及侵袭能力,miR-1271-5p可能在胃癌的发生发展中发挥抑癌作用。3.miR-1271-5p通过结合靶基因AVIL和TGFBR1 m RNA的3’UTR区,抑制其表达,在胃癌发生发展中发挥其抑癌作用。结论:miR-1271-5p在胃癌组织及细胞中表达下调,其低表达与胃癌的TNM分期相关;miR-1271-5p通过结合于其靶基因AVIL和TGFBR1 m RNA3’UTR区,抑制其表达,从而抑制胃癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力。
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