【摘 要】
：
目的：构建针对 RNA 结合蛋白 quaking (QKI)的特异性吸附海绵载体(QRE-sponge),验证其对肝癌细胞系 HepG2中内源性 QKI 分子的抑制作用。方法利用人源 QKI 的特异性识别效应原
【机 构】
：
第四军医大学生物化学与分子生物学教研室 西安市,710032第四军医大学药学院药物基因组学教研室 西安市,710032;中国人民解放军第 323 医院 西安市,710054;
论文部分内容阅读
目的：构建针对 RNA 结合蛋白 quaking (QKI)的特异性吸附海绵载体(QRE-sponge),验证其对肝癌细胞系 HepG2中内源性 QKI 分子的抑制作用。方法利用人源 QKI 的特异性识别效应原件(qua-king responsive element, QRE)序列,重复13个拷贝,串联克隆至 pEGFP-C2真核表达载体中,转染 HepG2肝癌细胞及293 T 细胞。通过 Real time PCR,双荧光素酶报告基因检测及 MTT 实验进一步验证该吸附海绵的效果及其对肝癌细胞系 HepG2增殖的影响。结果 pEGFP-C2-QRE-SP 载体经测序证实构建成功,可以成功的在 HepG2细胞中表达,其绿色荧光呈阳性,且转染24 h 后显著影响 HepG2细胞中 QKI 下游靶基因的表达(P ﹤0.05)。双荧光素酶报告基因系统显示, pGL3-QRE-SP 载体可以显著抑制外源性 QKI 的活性(P﹤0.05)。 MTT 结果显示 pEGFP-C2-QRE-SP 载体促进 HepG2细胞的增殖。结论 QKI 吸附海绵载体策略构建的 pEGFP-C2-QRE-SP 载体可以成功的诱骗吸附 QKI,并促进肝癌细胞系 HepG2增殖,为进一步研究 QKI的功能研究提供了良好工具。
其他文献
线粒体功能失调是导致线粒体疾病的主要原因,因此了解线粒体功能的调节机制非常重要。近期的研究表明,表观遗传修饰的对象不仅包括细胞核DNA还包括线粒体DNA,表观遗传修饰的
Th17细胞是以产IL-17 A、 IL-17 F为主的CD4+T细胞,并因此而得名。研究表明Th17细胞分化、转录及相关细胞因子等在机体免疫防御、免疫稳定维护中发挥重要作用。免疫相关性全
在胚胎发育时期,哺乳动物体内最先形成的器官即为心脏,由高保守性转录因子构成的调控体系控制着其信号通路的正确表达,并对心血管系统的正常发育及功能的维持发挥着重要作用
肝细胞肝癌( hepatocellular carcinoma, HCC)是世界上常见的一种恶性肿瘤,在中国的发病率和死亡率均很高。近年来,许多研究发现了一些新的生物标记物具有潜在的诊断和预后价
叶酰多聚谷氨酸合成酶( folypolyglutamate synthetase,FPGS)作为甲氨蝶呤(methotrexate,MTX)类抗肿瘤药物细胞内代谢过程中的关键酶,催化形成活性形式的MTX多聚谷氨酸,其异常是MTX耐药的重要原因之一.近年来研究发现,FPGS表达及活性的降低可使细胞内MTX多聚谷氨酸浓度降低,从而导致MTX耐药.FPGS基因多态性在MTX耐药中也起着重要的作用,但其具
基因芯片技术是建立在基因探针和杂交测序技术上的一种高效快速的核酸序列分析手段，该技术相比其他分子生物学工具，具有分析速度快、所需样品量少、污染少等优点。由于肿瘤的发
自然杀伤细胞(natural killer cell, NK cell)作为固有免疫应答的主要效应细胞,在机体抗肿瘤和抗病毒感染过程中发挥关键作用。自然细胞毒性受体( natural cytotoxicity rece
为探究吕家坨井田地质构造格局,根据钻孔勘探资料,采用分形理论和趋势面分析方法,研究了井田7
目的：研究雷帕霉素(Rapamycin, Rapa)和凋亡素(TAT-apoptin, T-ap)联合应用对神经胶质瘤的治疗作用。方法用 MTT 实验比较 Rapa、 TAT-apoptin 单用和联合应用对 U87细胞增殖
目的：重组表达肿瘤抑素30肽并研究其抗肿瘤活性。方法设计并合成30肽基因序列,将此序列与融合蛋白表达载体 PTYB21重组,转化到大肠埃希菌 BL-21(DE3)。 IPTG 诱导表达,几丁质