【摘 要】
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为构建高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）感染性克隆,本实验根据 PRRSV HuN4 株基因组序列设计并合成 PRRSV 特异性引物,应用 RT-PCR 技术分6段扩增了 PRRS VHuN4 株全基
【机 构】
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中国农业科学院上海兽医研究所／猪传染病研究室
【基金项目】
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NSFC-广联合基金项目(U0931003);上海市科技人才计划项目(09XD1405400);国际合作项目(2010DFB33920);国家生猪现代产业技术体系建设项目(NYCYTX-009);中央科研院所公益性基础科研业务费项目(2011JB03)
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为构建高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）感染性克隆,本实验根据 PRRSV HuN4 株基因组序列设计并合成 PRRSV 特异性引物,应用 RT-PCR 技术分6段扩增了 PRRS VHuN4 株全基因组 cDNA。将扩增的各个cDNA部分重叠片段分别克隆于 pBlueScriptⅡSK（＋）载体中构建了感染性重组质粒 pHuN4。并在病毒 cDNA5＇末端引入 sp6 启动子序列便于后期的体外转录获得病毒的转录本,在3＇末段 Poly（A）尾引入 NotⅠ酶切位点用于线性化 pHuN4;此外,
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