评价葡萄糖调节蛋白78(GRP78)与糖尿病因素影响瑞芬太尼后处理心肌保护作用的关系。

H9c2细胞在含10%胎牛血清DMEM/F12培养基中培养、传代，接种于96孔板(100 μl/孔)或6孔板(2 ml/孔)，接种密度10⁵个/ml，接种12 h后细胞贴壁。采用随机数字表法，将细胞分为6组(n＝24)：正常糖对照组(NC组)、正常糖缺氧复氧组(NHR组)、正常糖瑞芬太尼后处理组(NRP组)、高糖对照组(HC组)、高糖缺氧复氧组(HHR组)和高糖瑞芬太尼后处理组(HRP组)。NC组、NHR组和NRP组细胞换用正常糖DMEM培养基(5.5 mmol/L)培养48 h；HC组、HHR组和HRP组细胞换用高糖DMEM培养基(25.0 mmol/L)孵育48 h。NHR组、NRP组、HHR组和HRP组弃去培养液，加入Tyrode液，将培养板置于95%N₂-5%CO₂培养罐中孵育5 h，NHR组和HHR组更换为含10%胎牛血清的相应糖DMEM培养基孵育1 h，NRP组和HRP组更换为含终浓度为1 μmol/L瑞芬太尼的DMEM培养基孵育1 h。于复氧1 h时，每组取9孔细胞，采用CCK8法检测细胞活力；每组取12孔细胞，采用化学比色法测定培养液乳酸脱氢酶(LDH)活性；每组取3孔细胞，采用Western blot法测定GRP78表达。

与NC组比较，NHR组细胞活力降低，LDH活性升高，GRP78表达上调(P<0.05)；与NHR组比较，NRP组细胞活力升高，LDH活性降低，GRP78表达下调，HRP组细胞活力降低，LDH活性升高，GRP78表达上调(P<0.05)；与HC组比较，HHR组细胞活力降低，LDH活性升高，GRP78表达上调(P<0.05)；与HHR组比较，HRP组细胞活力、LDH活性和GRP78表达差异无统计学意义(P>0.05)；与NRP组比较，HRP组细胞活力降低，LDH活性升高，GRP78表达上调(P<0.05)。

糖尿病因素取消瑞芬太尼后处理心肌保护作用的机制可能与其上调GRP78的表达有关。