【摘 要】
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人源CD20作为B淋巴细胞表面特异性表达的膜蛋白,可以作为B淋巴细胞瘤免疫治疗的有效靶点。通过分子克隆引物设计,将CD20的胞外区以重复串联的方式克隆到pET28a载体上,两者之间通过Linker连接区（-GSSGGSSG-）连接,构建了表达载体pET28a-Bi20。测序正确后转化至大肠杆菌Transetta（DE3）中重组表达,优化表达条件为当菌液OD600为0.6～0.8时,以IPTG终浓度
【机 构】
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清华大学生命科学学院蛋白质研究技术中心
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目（81971469）；
论文部分内容阅读
人源CD20作为B淋巴细胞表面特异性表达的膜蛋白,可以作为B淋巴细胞瘤免疫治疗的有效靶点。通过分子克隆引物设计,将CD20的胞外区以重复串联的方式克隆到pET28a载体上,两者之间通过Linker连接区（-GSSGGSSG-）连接,构建了表达载体pET28a-Bi20。测序正确后转化至大肠杆菌Transetta（DE3）中重组表达,优化表达条件为当菌液OD600为0.6～0.8时,以IPTG终浓度1 mmol/L,37℃诱导5 h。表达产物带有C端6个组氨酸的亲和标签,以包涵体形式表达。通过包涵体洗涤条件优化,变性条件下的镍亲和层析纯化,透析复性条件的摸索和优化,最终获得纯度大于95%的可溶CD20胞外区同源二聚体Bi20,建立在大肠杆菌表达系统中规模化量产CD20胞外区多肽的方法。经Western Blot和ELISA检测证实纯化复性后CD20胞外区多肽Bi20具有良好的免疫原性。
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