miR-199a-3p靶向Smad1促进小鼠心肌纤维化相关基因的表达

来源 :南方医科大学学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hai_john
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目的探讨微小RNA-199a-3p(miR-199a-3p)对心肌纤维化的调控作用及其作用靶基因。方法原代分离并体外培养成体C57BL/6小鼠心肌成纤维细胞;脂质体转染法将miR-199a-3p模拟物和Smad1 siRNA瞬时转染至小鼠心肌成纤维细胞;双荧光素酶报告基因实验检测miR-199a-3p与潜在靶基因Smad1 3’端非翻译区(3’-UTR)的结合作用;实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和Western blot法分别检测小鼠心肌成纤维细胞转染miR-199a-3p后,Smad1及纤维化相关基因表达。Western blot检测转染miR-199a-3p,Smad1 siRNA后,小鼠心肌成纤维细胞中纤维化相关基因、Smad1和Smad3的激活水平。结果 RT-qPCR和Western blot结果证实在心肌成纤维细胞中过表达miR-199a-3p可以增强纤维化相关基因表达。双荧光素酶报告基因实验显示miR-199a-3p与Smad1 3’-UTR有结合作用。RT-qPCR和Western blot结果证实miR-199a-3p可在转录水平抑制Smad1表达。过表达miR-199a-3p和沉默Smad1均能一致性的通过激活Smad3通路而促进心肌成纤维细胞中纤维化相关基因表达。结论miR-199a-3p通过靶向Smad1,从而激活Smad3通路来促进纤维化相关基因表达。
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