【摘 要】
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为建立针对猪圆环病毒3型（porcine circovirus type 3,PCV3）的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法，使用DNAStar软件对GenBank中PCV3的ORF1基因进行保守区域分析，并使用Primer Premier 5软件对PCV3 ORF1基因的高度保守区域设计引物，经PCR扩增后构建了PCV3 ORF1基因的标准品质粒，以构建的标准品质粒为模板，分别从退火温
【基金项目】
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农业基础性长期性科技工作动物疫病观测监测任务资助项目（ZX06S0303）； 河北省青年科学基金资助项目（c2019313002）；
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为建立针对猪圆环病毒3型（porcine circovirus type 3,PCV3）的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法，使用DNAStar软件对GenBank中PCV3的ORF1基因进行保守区域分析，并使用Primer Premier 5软件对PCV3 ORF1基因的高度保守区域设计引物，经PCR扩增后构建了PCV3 ORF1基因的标准品质粒，以构建的标准品质粒为模板，分别从退火温度优化、标准曲线和熔解曲线的建立、特异性、灵敏性、重复性等方面对所建立的检测方法进行探究。特异性试验结果显示，建立的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR特异性良好，仅对PCV3存在特异性扩增，而对其他8种病毒均无扩增；灵敏度试验表明该方法最低检测量为6.55拷贝/μL,是常规PCR的100倍；以浓度为6.55×10~2～6.55×10~8拷贝/μL的标准品质粒构建的标准曲线相关系数为0.996,扩增效率可达99.7%;重复性试验结果显示，组内变异系数和组间变异系数均在2%以内。临床试验对100份猪血清进行PCV3检测，结果显示建立的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR的阳性率为16%（16/100）,高于常规PCR的阳性率10%（10/100）。结果表明，建立的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR可为PCV3的快速诊断、流行病学调查及防控提供技术支持。
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