【摘 要】
：
为了建立一种快捷、特异、敏感的检测猪圆环病毒3型(PCV3)的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,根据GenBank公布的PCV3全基因组序列,在rep基因高度同源保守区设计并合成1对特
【机 构】
：
河南农业大学牧医工程学院; 郑州市猪重大疫病防控重点实验室;
【基金项目】
：
河南省产学研合作计划基金资助项目(152107000003)
论文部分内容阅读
为了建立一种快捷、特异、敏感的检测猪圆环病毒3型(PCV3)的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR方法,根据GenBank公布的PCV3全基因组序列,在rep基因高度同源保守区设计并合成1对特异性引物,从阳性病料DNA中PCR扩增PCV3rep基因。PCR产物克隆入pMD~18-T载体中,构建重组质粒(pMD18-PCV3rep),转化到大肠杆菌DH-5α中。经PCR及测序鉴定后得到阳性重组质粒,作为荧光定量PCR的标准品模板,经过反应条件优化,建立了检测PCV3的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法。该检测方法线性关系良好,R2=0.998 2;仅PCV3阳性病料出现特异性扩增,而与另外6种病原无交叉反应;该方法检测下限为21.9copies/μL;批间及批内变异系数分别为0.394%~0.935%和0.112%~0.775%,均小于1%。经临床应用证实,该方法具有良好地特异性、敏感性和稳定性,为PCV3的早期检测、定量检测及后期研究提供了技术支持。
其他文献
目的探讨血清单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemotactic protein 1,MCP-1)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinase, MMP-9)、转化生长因子β1 (transforming growth fa
目的：观察米索前列醇治疗妊高症产后出血的效果。方法选取2015年10月～2016年2月我院收治的妊高症产后出血患者40例，将其简单随机化分对照组与观察组，各20例。对照组患者使用催产
文化和旅游部日前在其官方网站发布关于公布2018年“中国民族歌剧传承发展工程”重点扶持和滚动扶持剧目名单的通知.福建省歌舞剧院的《平凡的世界》、山东歌舞剧院的《沂蒙
目的探讨介入治疗对冠心病合并左心功能不全的改善作及效果。方法选取2014年8月-2015年7月我院收治的冠心病合并左心功能不全患者102例作为研究对象,按照随机数字分配的原则,
小琼：今年，我是在纽约度过新春佳节，但我也延续了过年欣赏歌剧或音乐会的习惯。最近，我在卡内基音乐厅观看了一部著名的20世纪歌剧：路易吉·诺诺的《偏狭的1960年》。近十年来
目的：探析曲美他嗪辅助标准抗心衰药物在慢性心力衰竭中的疗效。方法选取我院2013年11月～2015年11月收治的慢性心力衰竭患者72例作为研究对象，按数字法分为研究组和对照组，各36例
我公司是北京市交通局下属的一个大型专业运输企业。公司下设七个运输场、两个包装厂、一个修理厂、一个设备起重安装公司。现有在职职工5176人,退休职工3083人,拥有生产车辆
今年早些时候，音乐剧《风月俏佳人》在芝加哥进行了世界首演，8月16日．该剧在百老汇正式开演。《风月俏佳人》由1990年上映的同名电影改编，故事由加里马歇尔和J.F．劳顿创作，是一出典
9月13日-15日，由上海歌剧院及上海大剧院联合出品，德国埃尔福特剧院和上海歌剧院联合演出的歌剧《漂泊的荷兰人》以及囊括瓦格纳多部经典歌剧作品中著名唱段的集萃音乐会将重磅
创面愈合包括连续而又相互重叠的3个阶段，即炎症期、肉芽组织形成期和瘢痕形成期。早期炎症期主要由单核、巨噬细胞和中性粒细胞等向伤处迁移并释放多种细胞因子。中期由成纤