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摘 要：本文通过对实践工作中遇到的13例强奸致孕案胚胎、胎儿DNA检验的分析，总结出该类案件生物检材的提取、保存方法，以及如何从胚胎组织中提取胎儿的相关成分，从而提高胎儿STR分型的检出率。
关键词：强奸；绒毛膜；脐带血；胎儿；DNA检验
中图分类号：D919 文献标识码：A 文章编号：2095-4379-（2015）26-0162-02
作者简介：林添春（1981-），男，福建龙岩人，医学学士，广州市公安局花都区分局刑事警察大队，主检法医师，主要从事法医物证检验鉴定工作。
在一些强奸案件中，由于受害者年幼或智力低下等因素缺乏基本的生理卫生知识，以及部分受害者怕影响声誉不及时报警，导致被强奸后怀孕，最后只能提取人流术引产出的胚胎组织或胎儿作DNA检验来认定嫌疑人。孕期较长的可以提取引产胎儿的组织直接进行检验，而孕期较短的则需提取胚胎组织中胎儿的相关检材进行检验，存在一定的难度，本文介绍13例实际案件中提取不同检材，除1例检出混合基因型外，其余12例均检出胎儿完整的STR分型，供同行借鉴参考。
一、材料和方法
（一）样本
在工作实践中遇到的强奸致孕案件13宗；其中孕期12周以上的案件2宗，1宗提取了引产胎儿的手指，1宗提取了引产胎儿的脐带血5ml；孕期12周以下的案件11宗，均提取了引产出的胚胎组织，其中1例胚胎组织经福尔马林浸泡了24小时以上，其余10例胚胎组织均冷冻保存。
（二）样本预处理
取出引产胎儿的手指，用清水将其冲洗干净，然后用滤纸拭干，切取手指上的皮肤或肌肉组织少许，放到1.5ml的离心管中待用。
取出装有5ml脐带血的试管，将少许血液转移到棉纱或滤纸上，按常规血迹实验剪取适量的粘有血迹的棉纱或滤纸，放到1.5ml的离心管中，加入去离子水500ul，震荡，10000rpm离心3分钟，弃去上清液，沉淀物留在离心管中待用。
取出冷冻保存的胚胎组织，放置于干净的广口容器中，加入清水浸泡解冻，然后用清水反复冲洗，将胚胎组织上附着的血污冲洗干净；冲洗干净后往容器中加入蒸馏水，使胚胎组织充分展开，观察水中漂浮的呈分叶状的绒毛膜组织，剪取适量，放置于滤纸上，吸干液体，然后将组织转移至1.5ml的离心管中待用。
取出福尔马林浸泡的胚胎组织，放置于干净的广口容器中，用清水浸泡，反复冲洗多次；然后往容器中加入蒸馏水，由于福尔马林浸泡过的组织会脱水变硬变脆，无法观察到水中漂浮成分叶状的绒毛膜组织，分多部位剪取颜色偏白的膜状组织5份，分别转移到5个1.5ml的离心管中；之后分别往离心管中加入无水乙醇泡洗两次，弃去液体，沉淀物自然挥干待用。
（三）DNA提取
运用DNA IQTM Casework Pro Kit试剂盒（Promega公司，美国），参照该试剂盒操作手册中的方法步骤，往上述预处理过的样本中加入500ul裂解液，95℃震荡裂解30分钟，然后用Maxwell（Promega公司，美国）DNA自动纯化仪进行纯化处理。选取DNA洗脱液的体积为50ul。
（四）STR分型检测
上述DNA提取产物均用9700型PCR扩增仪（AB公司，美国）按PowerPlex_21试剂盒（Promega公司，美国）操作手册的程序进行PCR复合扩增，反应体系为10ul体系，模板DNA量为2ul。扩增产物采用3130XL型基因分析仪（AB公司，美国）进行分型检测。用GeneMapper v3.21进行DNA片段分析，观察该样本的STR分型结果。
二、结果
经GeneMapper v3.21进行DNA片段分析，其中经福尔马林浸泡的胚胎组织提取的5个样本中，其中2个检出母体基因分型，另外3个均检出相同的混合基因分型（图1），混合基因型不排除含有母体的成分，并且每个基因座上的等位基因均不超过3个；其余12例案件检材均在21个基因座上检出单一个体完整STR图谱，与母体基因分型进行比对，均符合单亲遗传关系。
三、讨论
从本文介绍的13例案件来看，对于强奸致孕的胚胎组织、胎儿的DNA检验与人体结缔组织DNA检验方法一致，难度不大，关键在于如何保存人流术后的引产物及从中提取胎儿的相关检材。
对于孕期在12周以上的人胚，胎儿形态已相当明显，作DNA检验时直接提取胎儿组织或脐带血最为方便，检出率高。而对于孕期较短的人胚，由于医院采取的人流术基本都是刮宫术，引产物中胎儿成分与孕妇子宫内膜成分混在一起，难于分辨。从本文介绍的案件中可以看到，从胚胎组织中提取胎儿的相关检材，从形态学上肉眼最容易分辨的就是绒毛组织，并且只要将提取到的绒毛组织在预处理环节清洗干净，基本可以确保检出胎儿的STR分型。
另外，本文介绍的11例孕期较短案件中，其中10例引产的胚胎组织直接冷藏保存，经过预处理均提取到绒毛组织，并检出完整的胎儿STR分型，而1例经福尔马林浸泡的胚胎组织则经多部位提取检验均未检出单一的胎儿STR分型，原因在于经福尔马林浸泡的组织会脱水变硬变脆，绒毛组织在水中浸泡无法复水展开，从形态上无法分辨。因此，对于强奸致孕的案件，在受害者行人流术后应马上将引产物送DNA实验室进行检验或送检后放置在专门的冰箱进行冷藏，而非由医院用福尔马林固定，从而影响胎儿STR分型检出的成功率，也不能由受害者自行保存，以免造成检材的污染。
[ 参 考 文 献 ]
[1]乐杰主编.妇产科学[M].北京：人民卫生出版社，2008.
[2]侯一平主编.法医物证学[M].北京：人民卫生出版社，2004.
[3]裴黎，牛慧媛等.塑料袋包裹胎儿经福尔马林浸泡4个月后DNA检验1例[J].中国法医学杂志，2006，21（3）.
关键词：强奸；绒毛膜；脐带血；胎儿；DNA检验
中图分类号：D919 文献标识码：A 文章编号：2095-4379-（2015）26-0162-02
作者简介：林添春（1981-），男，福建龙岩人，医学学士，广州市公安局花都区分局刑事警察大队，主检法医师，主要从事法医物证检验鉴定工作。
在一些强奸案件中，由于受害者年幼或智力低下等因素缺乏基本的生理卫生知识，以及部分受害者怕影响声誉不及时报警，导致被强奸后怀孕，最后只能提取人流术引产出的胚胎组织或胎儿作DNA检验来认定嫌疑人。孕期较长的可以提取引产胎儿的组织直接进行检验，而孕期较短的则需提取胚胎组织中胎儿的相关检材进行检验，存在一定的难度，本文介绍13例实际案件中提取不同检材，除1例检出混合基因型外，其余12例均检出胎儿完整的STR分型，供同行借鉴参考。
一、材料和方法
（一）样本
在工作实践中遇到的强奸致孕案件13宗；其中孕期12周以上的案件2宗，1宗提取了引产胎儿的手指，1宗提取了引产胎儿的脐带血5ml；孕期12周以下的案件11宗，均提取了引产出的胚胎组织，其中1例胚胎组织经福尔马林浸泡了24小时以上，其余10例胚胎组织均冷冻保存。
（二）样本预处理
取出引产胎儿的手指，用清水将其冲洗干净，然后用滤纸拭干，切取手指上的皮肤或肌肉组织少许，放到1.5ml的离心管中待用。
取出装有5ml脐带血的试管，将少许血液转移到棉纱或滤纸上，按常规血迹实验剪取适量的粘有血迹的棉纱或滤纸，放到1.5ml的离心管中，加入去离子水500ul，震荡，10000rpm离心3分钟，弃去上清液，沉淀物留在离心管中待用。
取出冷冻保存的胚胎组织，放置于干净的广口容器中，加入清水浸泡解冻，然后用清水反复冲洗，将胚胎组织上附着的血污冲洗干净；冲洗干净后往容器中加入蒸馏水，使胚胎组织充分展开，观察水中漂浮的呈分叶状的绒毛膜组织，剪取适量，放置于滤纸上，吸干液体，然后将组织转移至1.5ml的离心管中待用。
取出福尔马林浸泡的胚胎组织，放置于干净的广口容器中，用清水浸泡，反复冲洗多次；然后往容器中加入蒸馏水，由于福尔马林浸泡过的组织会脱水变硬变脆，无法观察到水中漂浮成分叶状的绒毛膜组织，分多部位剪取颜色偏白的膜状组织5份，分别转移到5个1.5ml的离心管中；之后分别往离心管中加入无水乙醇泡洗两次，弃去液体，沉淀物自然挥干待用。
（三）DNA提取
运用DNA IQTM Casework Pro Kit试剂盒（Promega公司，美国），参照该试剂盒操作手册中的方法步骤，往上述预处理过的样本中加入500ul裂解液，95℃震荡裂解30分钟，然后用Maxwell（Promega公司，美国）DNA自动纯化仪进行纯化处理。选取DNA洗脱液的体积为50ul。
（四）STR分型检测
上述DNA提取产物均用9700型PCR扩增仪（AB公司，美国）按PowerPlex_21试剂盒（Promega公司，美国）操作手册的程序进行PCR复合扩增，反应体系为10ul体系，模板DNA量为2ul。扩增产物采用3130XL型基因分析仪（AB公司，美国）进行分型检测。用GeneMapper v3.21进行DNA片段分析，观察该样本的STR分型结果。
二、结果
经GeneMapper v3.21进行DNA片段分析，其中经福尔马林浸泡的胚胎组织提取的5个样本中，其中2个检出母体基因分型，另外3个均检出相同的混合基因分型（图1），混合基因型不排除含有母体的成分，并且每个基因座上的等位基因均不超过3个；其余12例案件检材均在21个基因座上检出单一个体完整STR图谱，与母体基因分型进行比对，均符合单亲遗传关系。
三、讨论
从本文介绍的13例案件来看，对于强奸致孕的胚胎组织、胎儿的DNA检验与人体结缔组织DNA检验方法一致，难度不大，关键在于如何保存人流术后的引产物及从中提取胎儿的相关检材。
对于孕期在12周以上的人胚，胎儿形态已相当明显，作DNA检验时直接提取胎儿组织或脐带血最为方便，检出率高。而对于孕期较短的人胚，由于医院采取的人流术基本都是刮宫术，引产物中胎儿成分与孕妇子宫内膜成分混在一起，难于分辨。从本文介绍的案件中可以看到，从胚胎组织中提取胎儿的相关检材，从形态学上肉眼最容易分辨的就是绒毛组织，并且只要将提取到的绒毛组织在预处理环节清洗干净，基本可以确保检出胎儿的STR分型。
另外，本文介绍的11例孕期较短案件中，其中10例引产的胚胎组织直接冷藏保存，经过预处理均提取到绒毛组织，并检出完整的胎儿STR分型，而1例经福尔马林浸泡的胚胎组织则经多部位提取检验均未检出单一的胎儿STR分型，原因在于经福尔马林浸泡的组织会脱水变硬变脆，绒毛组织在水中浸泡无法复水展开，从形态上无法分辨。因此，对于强奸致孕的案件，在受害者行人流术后应马上将引产物送DNA实验室进行检验或送检后放置在专门的冰箱进行冷藏，而非由医院用福尔马林固定，从而影响胎儿STR分型检出的成功率，也不能由受害者自行保存，以免造成检材的污染。
[ 参 考 文 献 ]
[1]乐杰主编.妇产科学[M].北京：人民卫生出版社，2008.
[2]侯一平主编.法医物证学[M].北京：人民卫生出版社，2004.
[3]裴黎，牛慧媛等.塑料袋包裹胎儿经福尔马林浸泡4个月后DNA检验1例[J].中国法医学杂志，2006，21（3）.