【摘 要】
：
[背景]蜜环菌属(Armillaria)是一类营腐生或寄生生活的药食两用型真菌,研究其功能基因表达具有重要意义.[目的]筛选并获得蜜环菌(Armillaria mellea)最稳定的内参基因.[方法]以蜜环菌(A.mellea) 541为研究对象,以马铃薯琼脂糖培养基培养的菌丝和菌索为对照组,以添加还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶抑制剂氯化二亚苯基碘鎓(diphenyleneiodonium chlo
【机 构】
：
中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所,北京100193
论文部分内容阅读
[背景]蜜环菌属(Armillaria)是一类营腐生或寄生生活的药食两用型真菌,研究其功能基因表达具有重要意义.[目的]筛选并获得蜜环菌(Armillaria mellea)最稳定的内参基因.[方法]以蜜环菌(A.mellea) 541为研究对象,以马铃薯琼脂糖培养基培养的菌丝和菌索为对照组,以添加还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate,NADPH)氧化酶抑制剂氯化二亚苯基碘鎓(diphenyleneiodonium chloride,DPI)培养的菌丝和菌索为抑制剂组,以添加木屑培养的菌丝和菌索为诱导剂组,利用RT-qPCR技术和BestKeeper程序系统评估候选内参基因ACT-1、α-TUB、β-TUB l、γ-TUB、UBQ、EF-1γ、 18S rRNA biogenesis protein基因(18S rRNA BP)和GAPDH的表达量稳定性.[结果]内参基因EF-lγ在对照组、DPI抑制剂组和木屑诱导剂组中的表达量稳定性最好.[结论]EF-lγ为蜜环菌(A.mellea)的最佳内参基因,为蜜环菌属真菌功能基因表达研究提供了参考.
其他文献
[背景]诺如病毒(Norovirus,NoV)是引发全球人类急性胃肠炎的主要食源性致病原,具有广泛的遗传多样性,其中GⅡ.17型是亚洲地区的优势流行株,危害最为严重.研究表明,通过基因工程技术制备的诺如病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)具有良好的免疫保护作用,是目前NoV疫苗研发的主要思路.[目的]利用大肠杆菌(Escherichia coli)原核表达系统制备GⅡl.17型诺如病毒的VLP,为GⅡ.17型NoV疫苗的研发奠定基础.[方法]合成GⅡ.17型NoV衣壳蛋白VP1的基
[背景]碱性磷酸酶作为工具酶被广泛应用于各个领域,在免疫学检测方面应用较多的是PhoA家族的碱性磷酸酶,尚无关于PhoD家族的碱性磷酸酶在免疫学检测方面的研究.[目的]筛选出一株产高酶活性PhoD家族碱性磷酸酶的细菌,并将其phoD基因进行克隆表达,研究PhoD的酶学性质,为PhoD家族的碱性磷酸酶在免疫学检测方面的应用奠定一定的基础.[方法]采取有机质丰富的土样在有机磷平板中进行细菌分离,以4-硝基苯磷酸二钠盐(4-nitrophenyl phosphate disodium salt hexahydr
[背景]L-氨基酸能够提供香菇生长发育的部分养分需求,利用外源添加氨基酸的方式对香菇生长基质进行优化,对于香菇产业的增产提质具有积极的发展意义.[目的]利用外源添加丙氨酸(Ala)、丝氨酸(Ser)和天冬酰胺(Asn)的方式改善培养基成分,并探究复配氨基酸促进香菇生长的可能代谢途径.[方法]在三因素三水平上,通过响应面法对复配氨基酸的添加浓度进行优化,并对优化后培养基的香菇菌丝进行一系列生理指标测定.[结果]以香菇菌丝生长速度为响应值,筛选出复配氨基酸Ala、Asn和Ser的理论最佳添加浓度分别为174.
[背景]唾液酸苷酶是一类水解唾液酸糖复合物末端唾液酸残基的糖苷水解酶,广泛存在于动物和微生物中,具有重要的生物学功能.[目的]克隆一个长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)唾液酸苷酶基因(blsia42)并在大肠杆菌(Escherichia coli)中表达,探讨该重组酶的酶学性质.[方法]从长双歧杆菌中克隆唾液酸苷酶基因(blsia42),构建重组表达质粒pET-28a-blsia42并在大肠杆菌BL21(DE3)中异源表达.BlSia42粗酶液经Ni-NTA亲和层析纯化后研究其酶学
[目的]研究副溶血弧菌群体感应(quorum sensing,QS)系统核心调控子AphA和OpaR对calR基因以及CalR对Ⅵ型分泌系统l(type VI secretion system 1,T6SS1;vp1386-1420)相关基因的转录调控关系.[方法]提取副溶血弧菌野生株(wild-type,WT)和调控子基因突变株的总RNA,采用实时定量PCR (quantitative real-time PCR,qPCR)研究调控子对靶基因的转录调控关系;采用引物延伸实验研究靶基因的转录起始位点,并根
[目的]DNA磷硫酰化(phosphorothioation,PT)是由硫原子取代DNA骨架磷原子上的非桥联氧原子形成的一种新型DNA修饰.PT修饰除参与组成限制修饰系统外,其更为广泛的生物学功能仍有待揭示.PT修饰现有的检测方法操作复杂、成本高、耗时长,而具有操作简便、成本低、耗时短等特点的酶联免疫检测(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)成为新PT检测方法开发的优选.灭癌素链霉菌(Streptomyces gancidicus)中具有天蓝色链霉菌中PT修饰依
[背景]磷是植物生长所必需的大量元素,但绝大多数不能被植物吸收利用.然而溶磷微生物能够分泌有机酸来溶解土壤中难溶性磷,提高土壤中磷的利用率,促进植物生长,提高作物的产量和品质.[目的]探究高效解磷荧光假单胞菌CLW17菌株的pqqE和GDH基因的生理学功能.[方法]利用生物在线软件对2个基因编码蛋白进行生物信息学分析.利用同源重组技术分别获得pqqE和GDH基因缺失突变株(CLW17△pqqE,CLW 17△GDH),并使用接合转移的方式获得回补菌株(△pqqE/pqqE,△GDH/GDH).分别采用NB
[背景]深海热液环境中存在大量H2S及含硫化合物,许多微生物与大型生物形成了紧密的共生体系,例如硫氧化细菌,它们利用其独特的代谢体系协助宿主更好地适应极端环境,但目前尚未对热液底栖生物共附生的硫氧化细菌进行培养鉴定和功能分析.[目的]了解深海热液生物共附生硫氧化细菌的种群特征和功能特征,筛选出深海热液生物共附生微生物中的硫氧化细菌,分析其多样性及硫氧化功能,探讨这类细菌与宿主生物的共生关系.[方法]采用3种含硫培养基(M1、SPG、SOB)对热液区生物组织样品中的硫氧化细菌进行富集培养和分离纯化;利用16
[目的]本文旨在研究猪脾转移因子(TF)对新城疫(ND)病毒弱毒疫苗La Sota株的免疫增强作用及机理,为兽医临床防控提供理论依据.[方法]以4种不同剂量La Sota疫苗株分别单独、与TF联合免疫SPF鸡,14d后以ND病毒(NDV)参考强毒F48E9株(104.7 ELD50)进行攻毒,采用蛋白质芯片技术测定鸡外周血IL-6、IL-10、IL-16和IL-21浓度,并以血凝抑制(HI)试验和荧光定量RT-PCR方法分别检测鸡ND HI抗体效价和F48E9株的病毒血症水平.[结果]攻毒保护试验表明,单
[目的]探究广东本地及移民学龄儿童的饮食结构及肠道菌群分布的差异.[方法]以广东深圳为采样点,随机抽样选取48名广东本地儿童和34名移民儿童,进行膳食问卷调查和晨便采集.采用Mann-Whitney U test分析本地及移民儿童饮食因子摄入频率的差异,并使用Illumina Miseq高通量测序技术对儿童的肠道菌群进行测序分析.[结果]82例儿童的膳食模式大多以米饭为主食,搭配蔬菜、优质肉类以及水果.但本地儿童在复合碳水化合物、蔬菜、海产品方面有更高的摄入量(P＜0.05),而移民儿童在水果、低脂牛奶、