【摘 要】
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目的:构建α-突触核蛋白(α-synuclein,SNCA)和SNCA突变基因(SNCAmu)过表达转染293T细胞,观察内质网应激及细胞凋亡.方法:应用PCR技术扩增目的基因并插入慢病毒载体质粒,重组质粒的构建及包装293T细胞,转染24 h后用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达.MTT法检测未转染的293T细胞组(CON组)、转染空质粒的293T细胞组(NC组)、转染SNCA基因质粒的293T细胞组(OE组)和转染SNCAmu基因质粒的293
【机 构】
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同济大学附属天佑医院神经内一科,上海,200331,中国
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目的:构建α-突触核蛋白(α-synuclein,SNCA)和SNCA突变基因(SNCAmu)过表达转染293T细胞,观察内质网应激及细胞凋亡.方法:应用PCR技术扩增目的基因并插入慢病毒载体质粒,重组质粒的构建及包装293T细胞,转染24 h后用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达.MTT法检测未转染的293T细胞组(CON组)、转染空质粒的293T细胞组(NC组)、转染SNCA基因质粒的293T细胞组(OE组)和转染SNCAmu基因质粒的293T细胞组(OEm组),观察各组细胞病毒转染后不同时间(1、2、3、4、5 d)细胞增殖的情况.Western blotting法测定SNCA和SNCAmu诱导caspase-12的蛋白表达.结果:成功构建了pGC-FU-SNCA-GFP和pGC-FU-SNCAmu-GFP质粒及转染293T细胞,CON组、NC组、OE组和OEm组不同时间的细胞增殖具有统计学意义,SNCA和SNCAmu可能诱导293T细胞caspase-12的蛋白表达.结论:SNCA诱导caspase-12的内质网应激凋亡途径,可能是帕金森病致病机制之一.
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