【摘 要】
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针对细胞程序性死亡-配体1(PD-L1)和CXC趋化因子受体4型(CXCR4)两个靶点,设计anti-PD-L1&CXCR4双特异性纳米抗体的基因序列,C末端连接组氨酸标签(6×His标签),通过pET-22b(+)重组表达质粒转化大肠埃希菌E.coli BL21,经IPTG诱导表达,以可溶性形式存在于菌体裂解上清液.为了提高双特异性纳米抗体的产量和纯度,采用3种不同的方法进行样品制备和纯化.结果表明,通过机械裂菌并改进缓冲液的盐离子和咪唑浓度以及pH,经His Trap FF亲和色谱柱纯化后,对双特异性
【机 构】
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上海交通大学药学院细胞工程及抗体药物教育部工程研究中心,上海200240;上海交通大学分析测试中心,上海200240
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针对细胞程序性死亡-配体1(PD-L1)和CXC趋化因子受体4型(CXCR4)两个靶点,设计anti-PD-L1&CXCR4双特异性纳米抗体的基因序列,C末端连接组氨酸标签(6×His标签),通过pET-22b(+)重组表达质粒转化大肠埃希菌E.coli BL21,经IPTG诱导表达,以可溶性形式存在于菌体裂解上清液.为了提高双特异性纳米抗体的产量和纯度,采用3种不同的方法进行样品制备和纯化.结果表明,通过机械裂菌并改进缓冲液的盐离子和咪唑浓度以及pH,经His Trap FF亲和色谱柱纯化后,对双特异性纳米抗体分离效果较好,目的蛋白产量超过1 mg/L,纯度可达到97％.同时,anti-PD-L1&CXCR4双特异性纳米抗体能够与细胞表面两个抗原特异性结合,增强IL-2活化的人外周血单个核细胞(PBMC)对胰腺癌细胞株AsPC-1的杀伤能力,为其后续体内药效学评价奠定了基础.
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