【摘 要】
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目的 单克隆抗体(单抗)的稳定性是抗体成药性研究中的重要内容,本研究拟探讨从单抗分子的结构稳定性、胶体稳定性及分子间弱相互作用等方面进行稳定性评价的意义.方法 本研究以曲妥珠、利妥昔及贝伐珠为例,从不同角度表征了这3种单抗的稳定性特点,展示了单抗分子稳定性评价的多种维度和思路.首先,通过检测蛋白内源性荧光(intrinsic fluorescence,IF)技术测得熔解温度(melting temperature,Tm),对抗体分子的结构稳定性进行评估.其次,采用静态光散射技术(static light
【机 构】
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中国食品药品检定研究院单克隆抗体产品室,卫生部生物技术产品检定及标准化重点实验室,北京102629
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目的 单克隆抗体(单抗)的稳定性是抗体成药性研究中的重要内容,本研究拟探讨从单抗分子的结构稳定性、胶体稳定性及分子间弱相互作用等方面进行稳定性评价的意义.方法 本研究以曲妥珠、利妥昔及贝伐珠为例,从不同角度表征了这3种单抗的稳定性特点,展示了单抗分子稳定性评价的多种维度和思路.首先,通过检测蛋白内源性荧光(intrinsic fluorescence,IF)技术测得熔解温度(melting temperature,Tm),对抗体分子的结构稳定性进行评估.其次,采用静态光散射技术(static light scattering technique,SLS)预测抗体的胶体稳定性.随后,采用等温稳定性试验(60℃,48 h)对样品的稳定性表现进行实时监测.最后,采用动态光散射技术(dynamic light scattering technique,DLS)从蛋白溶解状态下其自身分子间弱相互作用角度预测蛋白聚集倾向.结果 IF技术检测发现3种抗体分子第1个熔解温度Tm1均在65℃以上,说明其结构均较稳定.SLS检测显示曲妥珠胶体稳定性最好,升温至95 ℃未检测到明显的聚集信号,而利妥昔和贝伐珠则在70℃左右出现明显聚集.等温稳定性试验也显示了类似的结果.DLS技术检测显示,曲妥珠的第二维里系数(B22)和扩散相互作用系数(KD)均为正值(3.19×10-3和65.46),预示长期胶体稳定性较好,利妥昔次之,而贝伐珠的B22和KD均为负值(-1.44×10-4和-6.46),提示蛋白分子间容易自缔合.结论 本研究通过多种技术、从多种角度探讨了单抗药物稳定性评价的内容、层次和深度,为抗体分子筛选、制剂配方优化、抗体分子与制剂配方间的不同组合,以及稳定性监测等提供了借鉴和参考.
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