雷洛昔芬抗体的制备及 ELISA 方法的初步建立

来源 :现代食品科技 | 被引量 : 0次 | 上传用户:hebe2010
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本文主要研究了雷洛昔芬抗体的制备和酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)方法的初步建立。实验中采用丁二酸酐对雷洛昔芬进行衍生,合成了雷洛昔芬半抗原。采用碳二亚胺法,将雷洛昔芬半抗原与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联合成免疫原和包被抗原,并通过紫外光谱进行鉴定,结果显示雷洛昔芬与载体蛋白偶联成功。免疫大白兔制备了雷洛昔芬抗体,抗体效价达 1.28×105,半数抑制浓度(half inhibit concentration,IC50)15.4 μg/L,与其他类似抗雌激素药物没有交叉反应,说明所制备的抗体特异性好。通过优化抗原抗体反应浓度初步建立了雷洛昔芬 ELISA 方法,结果显示最佳抗原浓度为300 μg/L,最佳抗体工作浓度为 1:1.0×105,标准曲线在 0.4~102.4 μg/L 范围内线性关系好,R2=0.9853,最低检测能力 0.4 μg/L。本研究为进一步开发雷洛昔芬快速检测试剂盒提供了技术参考。
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