根癌农杆菌介导的高粱遗传转化体系的建立

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用高粱幼穗诱导的愈伤组织与农杆菌共培养,成功地实现了农杆菌介导的高粱遗传转化,并筛选得到了转基因再生植株。经过PCR和Southern杂交,均已证实了外援基因已导入和整合到植物体中。得到的部分转基因植株,经过抗虫鉴定表明,具有很强的抗虫性。高粱遗传转化过程中最佳预培养时间是3~5d,最适宜的菌液浓度为OD600值=0.5~0.7,共培养培养基的最佳pH值是5.2~5.6,最佳温度为22~25℃,最佳共培养时间是3d。100μmol/L乙酰丁香酮对提高高粱愈伤组织遗传转化有非常显著的效果。 Agrobacterium-mediated genetic transformation of sorghum was successfully carried out by co-culturing the calli induced by sorghum spikelets with Agrobacterium tumefaciens, and the transgenic plants were screened. After PCR and Southern hybridization, foreign genes have been confirmed that the introduction and integration into plants. Some of the transgenic plants obtained after insect identification showed that it has a strong insect resistance. The optimum pre-culture time for sorghum genetic transformation was 3 ~ 5 days. The optimal concentration of OD600 was 0.5 ~ 0.7. The optimum pH value of co-culture medium was 5.2 ~ 5.6 and the optimum temperature was 22 ~ 25 ℃, the best co-culture time is 3d. The effect of 100μmol / L acetosyringone on improving the genetic transformation of sorghum callus was very significant.
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