论文部分内容阅读
摘要：目的 观察参白合剂对溃疡性结肠炎（UC）小鼠疾病活动指数（DAI）及血清中超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）的影响及其作用机制。方法 将50只小鼠随机分为空白组、模型组、柳氮磺胺吡啶（SASP）组、参白合剂高剂量组（参高组）、参白合剂低剂量组（参低组）5组，每组10只。造模各组自由饮用3%葡聚糖硫酸钠溶液，连续10 d。第11日始各组灌肠干预治疗，其中空白组、模型组给予生理盐水0.2 mL/10 g，SASP组给予0.025 g/mL SASP混悬液，参高组、参低组分别给予23.5、11.75 g/mL参白合剂混悬液，连续10 d。在第1、10、20日对小鼠进行DAI评分。第21日采用眼球取血法取血约2 mL，ELISA法检测SOD和MDA含量。结果 DAI评分显示：造模第10日，各造模组与空白组比较差异有统计学意义（P<0.05）；实验第20日，各治疗组与模型组比较差异有统计学意义（P<0.05）。模型组SOD浓度低于空白组（P<0.05），MDA浓度高于空白组（P<0.05）；SASP组、参高组、参低组SOD浓度明显高于模型组（P<0.05），MDA浓度明显低于模型组（P<0.05）；SASP组与参高组比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论 参白合剂通过提高SOD含量、减少脂质过氧化物生成，从而干预UC的病理过程。
关键词：溃疡性结肠炎；参白合剂；疾病活动指数；超氧化物歧化酶；丙二醛；小鼠
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2012）04-0038-02
溃疡性结肠炎（UC）是一种病因不明的慢性非特异性炎性肠病，以肠黏膜的慢性炎症和溃疡性改变为特征。近年研究发现，氧自由基（OFR）在UC的发病机制中起重要作用，有文献报道超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）与UC过程中肠损伤相关，且SOD与肠损伤程度呈负相关，MDA与肠损伤程度呈正相关[1-2]。本实验观察参白合剂对模型小鼠血清中SOD和MDA的影响，并在造模和治疗后对小鼠进行疾病活动指数（DAI）评分。
1 实验材料
1.1 动物
健康昆明小鼠50只，雌雄各半，体质量25～30 g，甘肃中医学院SPF实验中心提供，合格证号：SCXK（甘）2001-0001。
1.2 药物与试剂
参白合剂由苦参、白头翁、白及、乌梅炭、当归、黄柏、黄连、地榆炭、仙鹤草、白芍、延胡索、甘草组成。按处方比例由甘肃中医学院附属医院中药房称取药材、甘肃中医学院药理实验室制备。按照文献[3]计算动物给药量，用蒸馏水配制成浓度为11.75、23.50 g原药材/mL参白合剂混悬液。柳氮磺吡啶（SASP），上海三维制药有限公司生产，研碎过100目筛，用蒸馏水配制成浓度为0.025 g/mL的混悬液备用。DSS由Sigma公司生产，分子量为5 000，规格为50 g，配制成浓度为3%溶液备用。SOD和MDA检测试剂盒由兰州远景生物技术有限责任公司提供。
2 实验方法
2.1 造模与给药
将50只昆明小鼠采用随机数字表法分为空白组、模型组、SASP组、参白合剂高剂量组（参高组）、参白合剂低剂量组（参低组）5组，每组10只。参照文献[4]方法复制小鼠UC模型。3%葡聚糖硫酸钠（DSS）溶液小鼠自由饮用10 d，空白组自由饮用蒸馏水。模型复制过程中以普通饲料喂养。每日观察小鼠大便性状、饮食、毛发、活动状态等，造模之日起隔日测体质量，发现大便明显改变之日起按试剂盒所示隔日测隐血。以动物出现稀便、隐血阳性或肉眼血便中任何一项作为造模成功的标准。实验第11日开始各组灌肠给药：用1～2 mL注射器抽取药液后连接直径为2 mm的软胶管，蘸取石蜡油后插入小鼠肛门3～4 cm缓慢注药，倒置3 min，以使药液尽量保留在肠腔内。空白组、模型组均予以生理盐水0.2 mL/10 g灌肠，SASP组以0.025 g/mL SASP混悬液0.2 mL/10 g灌肠，参高组、参低组分别给予11.75、23.50 g/mL参白合剂混悬液0.2 mL/10 g灌肠。每日给药1次，连续10 d。
2.2 标本采集与检测
于实验开始后24 h和第10、20日观察小鼠体质量、大便性状及大便隐血，并根据Okayasu I等[5]的评分标准：DAI=（体质量下降分数+大便性状分数+便血分数）/3，按表1对各组小鼠进行DAI评分。第21日各组小鼠眼球取血约2 mL，5 000 r/min离心，取上清液，即为待测标本。SOD和MDA用ELISA法检测，步骤严格按照试剂盒所示进行。
5 讨论
UC属中医学“肠癖”、“泄泻”和“腹痛”等范畴。病因病机多为肝脾失调，湿、热、瘀毒壅滞大肠。参白合剂中苦参清热燥湿；白头翁清热解毒、凉血止痢；白及收敛止血、消肿生肌；乌梅炭涩肠止泻；当归活血止痛；黄柏、黄连清热燥湿、泻火解毒；地榆炭凉血止血、解毒敛疮；仙鹤草收敛止血；白芍养血敛阴、柔肝止痛；延胡索活血行滞止痛；甘草益气补中、缓急止痛。诸药合用，兼顾了UC发生过程中的湿、热、瘀等病理因素的相互影响，切合UC的病因病机和病理本质。
本实验DAI评分结果显示，造模小鼠自由饮用DSS溶液10 d后均出现明显UC症状；治疗10 d后，各治疗组与模型组比较，症状明显改善，体质量恢复如初或略有增长，大便性状恢复正常，隐血试验阴性，说明各治疗组治疗均有效。血清SOD、MDA检测显示，模型组SOD低于空白组，而MDA高于空白组。经药物干预后，SASP组及参高组、参低组血清中SOD含量升高、MDA含量降低，其中，以SASP组和参高组最为显著。提示参白合剂通过提高SOD含量、减少脂质过氧化物生成，从而干预UC的病理过程，这可能是参白合剂治疗UC的有效作用机制。
参考文献：
[1] 周燕红，于皆平，何小飞.大鼠实验性结肠炎中超氧化物歧化酶、丙二醛的变化[J].咸宁学院学报，2003，17（6）：391-393.
[2] 马春曦，李志晋，詹丽英等.溃疡性结肠炎大鼠肠组织中MDA、SOD损伤指数的动态变化及其相关性研究[J].江西医学院学报，2005，45（3）：4-6.
[3] 苗明三.实验动物和动物实验技术[M].北京：中国中医药出版社，1997：142-145.
[4] Cooper HS， Murthy SN， Shah RS， et al. Clinicopathologic study of dextran sulfate sodium experimental murine colitis[J]. Lab Invest，1993，69：238-249.
[5] Okayasu I， Hatakeyama S， Yamada M， et al. A novel method in the induction of reliable experimental acute and chronic ulcerative colitis in mice[J]. Gastroenterology，1990，98：694-702.
（收稿日期：2011-11-04，编辑：于娟娟）
关键词：溃疡性结肠炎；参白合剂；疾病活动指数；超氧化物歧化酶；丙二醛；小鼠
中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1005-5304（2012）04-0038-02
溃疡性结肠炎（UC）是一种病因不明的慢性非特异性炎性肠病，以肠黏膜的慢性炎症和溃疡性改变为特征。近年研究发现，氧自由基（OFR）在UC的发病机制中起重要作用，有文献报道超氧化物歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）与UC过程中肠损伤相关，且SOD与肠损伤程度呈负相关，MDA与肠损伤程度呈正相关[1-2]。本实验观察参白合剂对模型小鼠血清中SOD和MDA的影响，并在造模和治疗后对小鼠进行疾病活动指数（DAI）评分。
1 实验材料
1.1 动物
健康昆明小鼠50只，雌雄各半，体质量25～30 g，甘肃中医学院SPF实验中心提供，合格证号：SCXK（甘）2001-0001。
1.2 药物与试剂
参白合剂由苦参、白头翁、白及、乌梅炭、当归、黄柏、黄连、地榆炭、仙鹤草、白芍、延胡索、甘草组成。按处方比例由甘肃中医学院附属医院中药房称取药材、甘肃中医学院药理实验室制备。按照文献[3]计算动物给药量，用蒸馏水配制成浓度为11.75、23.50 g原药材/mL参白合剂混悬液。柳氮磺吡啶（SASP），上海三维制药有限公司生产，研碎过100目筛，用蒸馏水配制成浓度为0.025 g/mL的混悬液备用。DSS由Sigma公司生产，分子量为5 000，规格为50 g，配制成浓度为3%溶液备用。SOD和MDA检测试剂盒由兰州远景生物技术有限责任公司提供。
2 实验方法
2.1 造模与给药
将50只昆明小鼠采用随机数字表法分为空白组、模型组、SASP组、参白合剂高剂量组（参高组）、参白合剂低剂量组（参低组）5组，每组10只。参照文献[4]方法复制小鼠UC模型。3%葡聚糖硫酸钠（DSS）溶液小鼠自由饮用10 d，空白组自由饮用蒸馏水。模型复制过程中以普通饲料喂养。每日观察小鼠大便性状、饮食、毛发、活动状态等，造模之日起隔日测体质量，发现大便明显改变之日起按试剂盒所示隔日测隐血。以动物出现稀便、隐血阳性或肉眼血便中任何一项作为造模成功的标准。实验第11日开始各组灌肠给药：用1～2 mL注射器抽取药液后连接直径为2 mm的软胶管，蘸取石蜡油后插入小鼠肛门3～4 cm缓慢注药，倒置3 min，以使药液尽量保留在肠腔内。空白组、模型组均予以生理盐水0.2 mL/10 g灌肠，SASP组以0.025 g/mL SASP混悬液0.2 mL/10 g灌肠，参高组、参低组分别给予11.75、23.50 g/mL参白合剂混悬液0.2 mL/10 g灌肠。每日给药1次，连续10 d。
2.2 标本采集与检测
于实验开始后24 h和第10、20日观察小鼠体质量、大便性状及大便隐血，并根据Okayasu I等[5]的评分标准：DAI=（体质量下降分数+大便性状分数+便血分数）/3，按表1对各组小鼠进行DAI评分。第21日各组小鼠眼球取血约2 mL，5 000 r/min离心，取上清液，即为待测标本。SOD和MDA用ELISA法检测，步骤严格按照试剂盒所示进行。
5 讨论
UC属中医学“肠癖”、“泄泻”和“腹痛”等范畴。病因病机多为肝脾失调，湿、热、瘀毒壅滞大肠。参白合剂中苦参清热燥湿；白头翁清热解毒、凉血止痢；白及收敛止血、消肿生肌；乌梅炭涩肠止泻；当归活血止痛；黄柏、黄连清热燥湿、泻火解毒；地榆炭凉血止血、解毒敛疮；仙鹤草收敛止血；白芍养血敛阴、柔肝止痛；延胡索活血行滞止痛；甘草益气补中、缓急止痛。诸药合用，兼顾了UC发生过程中的湿、热、瘀等病理因素的相互影响，切合UC的病因病机和病理本质。
本实验DAI评分结果显示，造模小鼠自由饮用DSS溶液10 d后均出现明显UC症状；治疗10 d后，各治疗组与模型组比较，症状明显改善，体质量恢复如初或略有增长，大便性状恢复正常，隐血试验阴性，说明各治疗组治疗均有效。血清SOD、MDA检测显示，模型组SOD低于空白组，而MDA高于空白组。经药物干预后，SASP组及参高组、参低组血清中SOD含量升高、MDA含量降低，其中，以SASP组和参高组最为显著。提示参白合剂通过提高SOD含量、减少脂质过氧化物生成，从而干预UC的病理过程，这可能是参白合剂治疗UC的有效作用机制。
参考文献：
[1] 周燕红，于皆平，何小飞.大鼠实验性结肠炎中超氧化物歧化酶、丙二醛的变化[J].咸宁学院学报，2003，17（6）：391-393.
[2] 马春曦，李志晋，詹丽英等.溃疡性结肠炎大鼠肠组织中MDA、SOD损伤指数的动态变化及其相关性研究[J].江西医学院学报，2005，45（3）：4-6.
[3] 苗明三.实验动物和动物实验技术[M].北京：中国中医药出版社，1997：142-145.
[4] Cooper HS， Murthy SN， Shah RS， et al. Clinicopathologic study of dextran sulfate sodium experimental murine colitis[J]. Lab Invest，1993，69：238-249.
[5] Okayasu I， Hatakeyama S， Yamada M， et al. A novel method in the induction of reliable experimental acute and chronic ulcerative colitis in mice[J]. Gastroenterology，1990，98：694-702.
（收稿日期：2011-11-04，编辑：于娟娟）