【摘 要】
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目的建立单个T淋巴细胞的手工显微分离与目的基因扩增方法,为基于单个T淋巴细胞的相关研究奠定基础。方法利用倒置显微镜和自制玻璃毛细管对T淋巴细胞进行手工单细胞显微分离
【机 构】
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广东药科大学生命科学与生物制药学院/广东省生物技术候选药物研究重点实验室;
【基金项目】
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国家自然科学基金(31100664,31300737,31400149);广东省自然科学基金项目(2014A030313586,10151022401000024);广东省科技计划项目(2016A020215157);广东药科大学创新强校工程项目(2015QTLXXM38)
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目的建立单个T淋巴细胞的手工显微分离与目的基因扩增方法,为基于单个T淋巴细胞的相关研究奠定基础。方法利用倒置显微镜和自制玻璃毛细管对T淋巴细胞进行手工单细胞显微分离,并针对T淋巴细胞个体小、胞质少的特点优化反转录与PCR条件,实现单个T淋巴细胞水平的反转录与目的基因扩增。结果有效地对单个T淋巴细胞进行了手工显微分离,优化了单细胞的反转录和PCR条件,成功扩增出看家基因和多个特定目的基因,在此基础上又对TCR基因进行了扩增。结论所建立并优化的手工显微单细胞分离技术与单细胞RT-PCR技术能有效地从单个T淋巴细胞中扩增目的基因,为今后基于单细胞水平研究高度异质性T细胞的功能、特性奠定了基础。
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