活化T细胞核因子非编码基因对人脐静脉内皮细胞调节作用的实验研究

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目的

探讨活化T细胞核因子非编码基因(noncoding repressor of nuclear factor of activated T cells, NRON)在人脐静脉内皮细胞内过表达和干扰后,对活化T细胞核因子(nuclear factor of activated T cells, NFAT)基因表达的影响,并探讨其对人脐静脉内皮细胞生长、成管能力和迁移能力的影响。

方法

使NRON基因在人脐静脉内皮细胞中过表达,并使用短发夹RNA (shRNA)干扰培养成NRON过表达细胞系和shRNA干扰细胞系。各细胞系采用不同浓度的小牛血清(1%、2%、4%、8%和10%)处理48 h,观察其细胞生长变化。以正常HUVEC细胞系作为对照,另设加入pBABE空载体细胞系和pSuper空载体细胞系作为对照。采用非放射性细胞增殖实验、内皮细胞成管实验、内皮细胞迁移实验这几种血管内皮细胞功能实验,检测血管内皮细胞基本特性的变化。

结果

非放射性细胞增殖实验结果显示,各细胞系采用不同浓度小牛血清处理48 h,其细胞生长均与小牛血清浓度呈正相关(正常HUVEC细胞系r=0.91;pBABE空载体细胞系, r=0.88;NRON过表达细胞系, r=0.89;pSuper空载体细胞系, r=0.95;shRNA干扰细胞系, r=0.97);与正常HUVEC细胞系和pBABE空载体细胞系比较,NRON过表达细胞系细胞增殖能力较低(各浓度P均<0.05);与正常HUVEC细胞系和pSuper空载体细胞系比较,shRNA干扰细胞系增殖能力较高(各浓度P均<0.05)。细胞成管实验中,与正常HUVEC细胞系和pBABE空载体细胞系比较,NRON过表达细胞系细胞成管能力较低[分别为(23.33±3.01)条和(19.67±1.42)条比(8.33±0.12)条, P均<0.05];与正常HUVEC细胞系和pSuper空载体细胞系[(17.33±2.93)条]比较,shRNA干扰细胞系[(36.00±0.51)条]细胞成管能力则较高(P均<0.05)。细胞迁移实验中,与正常HUVEC细胞系和pBABE空载体细胞系比较,NRON过表达细胞系细胞迁移数较少[分别为(5145±72)个和(4411±117)个比(1857±65)个,P均<0.05];与正常HUVEC细胞系和pSuper空载体细胞系[(3883±109)个]比较,shRNA干扰细胞系[(6987±50)个]细胞迁移数较多(P均<0.05)。

结论

NRON基因过表达和shRNA干扰,分别使NFAT基因呈抑制或激活状态。NRON基因过表达可抑制人脐静脉内皮细胞生长,减弱其成管能力和细胞迁移能力。shRNA干扰NRON后可促进人脐静脉内皮细胞生长,增强其成管能力和细胞迁移能力。

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