【摘 要】
：
目的 建立一种基于错配识别蛋白的高特异性核酸检测方法.方法 利用蛋白质体外表达和纯化技术获取MutS,并对MutS的错配识别特性进行测定;利用MutS-RCA检测体系对2个碱基错配的不同DNA片段进行检测.结果 MutS蛋白能够有效区分开互补双链和非互补双链DNA,能够稳定结合在非互补双链DNA上,基于MutS的高特异性的单碱基错配核酸检测方法取得了良好的特异性.结论 MutS-RCA检测体系提高了单碱基错配核酸检测的特异性.
【机 构】
：
中国医科大学生命科学学院生物化学与分子生物学教研室,辽宁沈阳110122;中国医科大学附属口腔医学院口腔颌面外科教研室,辽宁沈阳110001
论文部分内容阅读
目的 建立一种基于错配识别蛋白的高特异性核酸检测方法.方法 利用蛋白质体外表达和纯化技术获取MutS,并对MutS的错配识别特性进行测定;利用MutS-RCA检测体系对2个碱基错配的不同DNA片段进行检测.结果 MutS蛋白能够有效区分开互补双链和非互补双链DNA,能够稳定结合在非互补双链DNA上,基于MutS的高特异性的单碱基错配核酸检测方法取得了良好的特异性.结论 MutS-RCA检测体系提高了单碱基错配核酸检测的特异性.
其他文献
阿尔茨海默病(Alzheimer disease, AD)是一种以认知功能障碍为主要临床特征的神经退行性疾病,AD患者大脑中有金属离子的异常分布,其中锰离子的病理作用近年来倍受关注.锰离子可通过血脑屏障,锰离子暴露者出现认知功能受损,但是,目前其机制尚不清楚.本综述旨在分析金属锰离子超载对Aβ蛋白的产生及聚集、Tau蛋白异常磷酸化、线粒体代谢和p53的影响,阐述锰与AD发病的相关性.
目的 探讨减重手术对糖尿病大鼠肾损伤的保护作用及其可能的作用机制.方法 SPF级SD大鼠45只,随机分为假手术组(Sham组)、糖尿病肾损伤模型组(DN组)及减重手术干预组(DJB组).除Sham组外,其余两组大鼠建立糖尿病肾损伤模型,模型成功后DJB组大鼠给予减重手术治疗;生化检测血清肌酐(Scr)和尿素氮(BUN)含量;HE染色观察肾脏组织病理学变化;ELISA检测大鼠肾组织中超过氧化物歧化酶(SOD)与活性及丙二醛(MDA)含量;TUNEL染色观察肾组织细胞凋亡情况;免疫荧光染色检测肾组织过氧化物酶
目的 探讨长链非编码RNAFENDRR对前列腺癌DU-145细胞生物学行为的影响.方法 real-time PCR方法检测前列腺癌细胞株DU-145和正常前列腺上皮细胞RWPE-1中FENDRR的表达水平.构建FENDRR基因表达载体pcDNA-FENDRR并转染DU-145细胞,real-time PCR方法验证转染效率.FENDRR基因过表达后,平板克隆实验实验检测DU-145细胞增殖能力的变化;流式细胞术检测DU-145细胞的凋亡率;划痕实验与Transwell实验检测DU-145细胞迁移和侵袭能力
目的 探讨miR-98在涎腺腺样囊性癌组织中的表达及其对腺样囊性癌细胞系ACC-M增殖以及迁移能力的影响.方法 通过实时PCR检测5例涎腺腺样囊性涎组织及癌旁正常组织miR-98的表达水平;将miR-98模拟物瞬时转入高转移腺样囊性癌细胞系(ACC-M)使miR-98过表达,并通过实时PCR方法验证;流式细胞仪分析转染后ACC-M细胞周期的改变,甲基噻唑基四唑比色法检测转染后ACC-M细胞的增殖,划痕实验检测转染后ACC-M细胞的迁移能力,免疫印迹法检测转染后ACC-M细胞细胞周期蛋白CyclinB与CD
文章阐述了复合图书馆的特征,对比分析了传统图书馆与数字图书馆的优劣势,提出了复合图书馆的建设策略.
目的 观察表没食子儿茶素没食子酸酯(Epigallocatechin gallate,EGCG)对失血性休克大鼠炎症反应的抑制作用,探讨TLR4/Myd88信号通路的作用机制.方法 SD大鼠30只,随机分为假手术组(Sham)、失血性休克(Hematogenic shock,HS)组、EGCG治疗组;HS和EGCG组大鼠均采用35％放血法建立HS模型,EGCG组于HS发生后腹腔注射EGCG(50mg/Kg).HS发生4h后处死各组大鼠,HE染色观察肺组织病理学变化,ELISA检测炎性因子TNF-α、IL-
通过显微组织观察和力学性能测试,研究淬火、回火和高温调质热处理工艺对GCr15Si Mn轴承钢组织和性能的影响。结果表明,高温调质热处理工艺可以改善碳化物组织形态,并细化碳
目的 研究结肠癌中miR-144与Krüppel样因子12(KLF12)的表达,并探讨二者表达的相关性及其临床意义.方法 通过Oncomine公共数据库分析结直肠癌中KLF12基因mRNA的表达,通过UALCAN、GEPIA公共数据库分析结肠癌中KLF12基因mRNA的表达、通过GEPIA公共数据库分析KLF12表达与肿瘤病理分期的关系以及KLF12表达与患者生存期的关系.通过OncomiR公共数据库分析miR-144在结肠癌中的表达以及miR-144表达与患者生存期的关系.通过在线预测工具(Target
目的 观察下调FAM111B对宫颈癌细胞系C-33A和HeLa增殖、细胞周期和凋亡的影响及其可能机制.方法 应用慢病毒载体siRNA-FAM111B及Null,分别感染C-33A和HeLa细胞.实时定量PCR方法(qRT-PCR)和Western blot方法分别检查各组细胞FAM111B基因与蛋白的表达.应用CCK-8方法检测FAM 111B对细胞增殖能力的影响.流式细胞术PI染色细胞周期检测各组细胞周期变化.流式细胞术Annexin V/PI双染方法检测各组细胞的凋亡情况.Western blot法检
目的 构建小鼠resistin基因表达载体,并将其导入小鼠巨噬细胞系RAW264.7细胞中,从而建立能够高表达resistin的单核巨噬细胞系.方法 从小鼠脂肪组织提取mRNA,PCR后连接到真核表达载体进行测序验证,同时构建慢病毒载体,感染至RAW264.7细胞中,通过荧光显微镜观察是否转染成功,ELISA方法检测蛋白分泌水平.结果 双酶切结果显示构建的质粒中有大小为345bp的resistin插入条带;经过测序及BLAST比对,插入序列与Genebank中resistin的小鼠CDS序列相同,没有移码