目的 研究抗凝血酶(AT)L99氨基酸位点突变导致遗传性AT缺陷症的分子机制.方法 利用果蝇细胞表达系统表达纯化野生型AT以及L99V、L99A、L99I和L99S等突变型AT蛋白;采用肝素结合实验检测重组AT蛋白与低分子量肝素钠的结合能力;采用表面等离子共振(SPR)技术检测重组AT蛋白与凝血酶(FⅡa)及活化凝血因子X(FXa)的结合能力;将野生型及各突变型AT蛋白的浓度调整至正常AT血浆浓度后,采用发色底物法检测重组AT蛋白活性.结果 考马斯亮蓝染色及免疫印迹法显示各突变蛋白与野生型AT蛋白大小一致,未见明显杂带.肝素结合实验显示AT L99V、L99A、L99I和L99S突变蛋白与低分子量肝素钠的结合分别为相同浓度野生型AT蛋白的(44.8±3.6)％、(118.9±14.0)％、(15.2±8.8)％和(23.0±8.2)％.SPR检测显示AT L99V、L99A、L99I和L99S突变蛋白与FⅡa的结合分别为相同浓度野生型AT蛋白的13％、57％、3％和29％;AT L99V、L99A、L99I和L99S突变蛋白与FXa的结合分别为相同浓度野生型AT蛋白的7％、51％、1％和25％.发色底物法显示,野生型AT蛋白及L99V、L99A、L99I、L99S等突变型AT蛋白活性分别为146.5％、21.4％、120.9％、10.8％和39.0％.结论 L99位点突变破坏了AT与肝素、FⅡa及FXa的结合,使AT蛋白活性下降,从而导致遗传性AT缺陷症。