人类SIRT6蛋白硝基化位点突变体的构建

来源 :徐州医学院学报 | 被引量 : 0次 | 上传用户：rserrrrr

【摘要】

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目的构建人类SIRT6蛋白硝基化位点突变体，用于其活性调节机制的研究。方法以野生型pCD—NA3．1-SIRT6-FLAG真核表达重组体为模板，用定点突变PCR的方法获得SIRT6的酪氨酸突变体；突

【作者】

：

曾凡强王德广

【机构】

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徐州医学院解剖学教研室

【出处】

：

徐州医学院学报

【发表日期】

：

2014年12期

【关键词】

：

SIRT6 硝基化位点突变体真核表达 SIRT6 mutants at nitrated sites eukaryotic expression

【基金项目】

：

江苏省高校自然科学基金重点项目（10KJA310053）,江苏省“六大人才高峰”项目（2013-SWYY-024）,江苏省“青蓝工程”项目资助课题

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目的构建人类SIRT6蛋白硝基化位点突变体，用于其活性调节机制的研究。方法以野生型pCD—NA3．1-SIRT6-FLAG真核表达重组体为模板，用定点突变PCR的方法获得SIRT6的酪氨酸突变体；突变产物转化大肠杆菌DH5α进行筛选、序列测定；野生型和突变型重组体转到293H细胞，Westernblot鉴定SIRT6的表达。结果①经PCR法得到了SIRT6的突变重组体；②SIRT6突变重组体测序图谱与预期结果完全一致；③Westernblot检测野生和突变型SIRT6蛋白能表达。结论获得了能真核表达硝基化

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