论文部分内容阅读
目的:帕金森病(Parkinson’s disease, PD)是中老年人常见的中枢神经系统退行性疾病，影响着2%的60岁以上中老年人群的生存质量。PD起病隐匿，早期无明显临床症状，且具有严重的致残性、持续进展性、无法逆转性以及现阶段治疗上的无法根治性，目前的研究多聚焦于疾病的初始阶段。由于当前几乎没有可能对处于临床前期的患者做出诊断，导致直接开展人类PD临床前期风险预警机制的研究无法进行。在PD发病中有一种起重要作用的蛋白质α-突触核蛋白（α-synuclein,α-syn）的异常聚集常被认为是导致神经元退变的主要原因。有文献报道，PD病程进展有可能是α-syn由胃肠道神经丛扩散到相联的神经系统，累及延髓之后，伴随损伤神经元数量的增加而出现临床症状。因此本论文选择与人类生理最为相近的灵长类动物食蟹猴开展PD动物模型的研究以及构建α-突触核蛋白指标体系，对于解决PD临床前期进行病理发展评价、分级分类评估这一难题意义重大。方法：1.选择不同年龄段的健康食蟹猴9只作为自然老化动物模型，青年猴3只（4岁），中年猴3只（10-11岁），老年猴3只（15-16岁）。用免疫组织化学方法检测α-syn和n-syn在不同年龄段食蟹猴结肠中的表达，免疫荧光双标观察α-syn和n-syn的共定位。2.选择不同年龄段的健康食蟹猴9只作为1-甲基-4-苯基-1.2.3.6-四氢吡啶(1-methyl-4-phenyl-1.2.3.6-tetrahydrophridine, MPTP)造模动物模型，青年猴3只（4岁），中年猴3只（10-11岁），老年猴3只（15-16岁）。用免疫组织化学方法检测α-syn和n-syn在不同年龄段食蟹猴结肠中的表达，免疫荧光双标观察α-syn和n-syn的共定位。结果：1.免疫荧光双重标记的结果证实了α-syn和n-syn在自然老化食蟹猴结肠中存在共定位。免疫组化的结果显示α-syn和n-syn在不同年龄段自然老化食蟹猴结肠中均有表达，但α-syn和n-syn在老年食蟹猴表达量最高，在青年食蟹猴表达量最低。2.免疫荧光双重标记的结果证实了α-syn和n-syn在MPTP造模食蟹猴结肠中存在共定位。免疫组化的结果显示α-syn和n-syn在不同年龄段MPTP造模食蟹猴结肠中均有表达，但α-syn和n-syn在MPTP造模老年食蟹猴表达量最高，在MPTP造模青年食蟹猴表达量最低。结论：1.本实验中自然老化食蟹猴的免疫组化实验结果显示随着年龄的老化，α-syn和n-syn聚集性表达均增高，荧光双重标记显示了α-syn和n-syn的共存。证实了自然老化对α-syn的氧化应激修饰有正向关系，可增加具有毒性的n-syn聚合物的表达。2.本实验MPTP造模食蟹猴的免疫组化结果显示随着年龄的增长，α-syn和n-syn的聚集性表达均增高，荧光双重标记显示了α-syn和n-syn的共存。提示老化带来的α-syn含量增高协同了MPTP的毒性作用，共同促进了α-syn硝基化的修饰反应，最终导致MPTP老年猴结肠组织的肌间神经丛中高表达了n-syn。3.本实验对α-syn在PD病理进程中可能从外周神经系统开始的学说，进行了一定程度的验证，需继续结合PD敏感脑区做深入的机制研究。