基于CRISPR/Cas9系统的HEK293T细胞DMD基因第51号外显子的靶向敲除

来源 :基础医学与临床 | 被引量 : 0次 | 上传用户：k60775

【摘要】

：

目的应用CRISPR/Cas9基因编辑技术,完成HEK293T细胞中DMD基因第51号外显子（exon51）高效的靶向敲除。方法设计靶向人DMD基因exon51 5＇端及3＇端的sgRNA并克隆至CRISPR/Cas9载体质粒

【作者】

：

李双马珊珊崔思颖屈素真蔡奥捷关方霞孔祥东

【机构】

：

郑州大学第一附属医院遗传与产前诊断中心,郑州大学生命科学学院

【出处】

：

基础医学与临床

【发表日期】

：

2018年3期

【关键词】

：

CRISPR/Cas9 DMD基因单载体质粒 HEK293T细胞外显子敲除 CRISPR/Cas9 DMD gene single vector pla

【基金项目】

：

2016年度河南省产学研合作项目（162107000017）

下载到本地 , 更方便阅读

下载此文赞助VIP

声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架

论文部分内容阅读

目的应用CRISPR/Cas9基因编辑技术,完成HEK293T细胞中DMD基因第51号外显子（exon51）高效的靶向敲除。方法设计靶向人DMD基因exon51 5＇端及3＇端的sgRNA并克隆至CRISPR/Cas9载体质粒PX459中,转染至HEK293T细胞后,提取基因组DNA并使用Surveyor法检测切割活性;使用目标外显子两端切割活性最高的sgRNA构建PX459-2sgRNA质粒,转染至HEK293T细胞后用PCR及T载体测序检测靶向外显子切除情况。结果50%的HEK293T细胞中DMD基因

其他文献

体质量增加及减少与妇女骨折有关

据美国WebMD医学新闻网（2015-02-20）报道，一篇大型研究发现，体质量增加及减少都与停经后妇女骨折发生率增加有关，挑战了现有的“体质量增加可预防这些人骨折”的观点。

期刊

体质量增加骨折发生率妇女医学新闻停经后

党是什么模样

期刊

SNP位点rs6858698对慢性淋巴细胞白血病易感性的影响

目的探讨rs6858698位点的功能活性及其对慢性淋巴细胞白血病易感性的影响。方法双荧光素酶报告基因系统检测含有rs6858698位点的DNA片段的调控活性。利用CRISPR/Cas9系统在HEK293T细胞内构建点突变的稳定细胞株。全转录组测序分析(RNA-seq)不同基因型的细胞株之间的基因表达差异情况。并用实时定量PCR(RT-q PCR)和CRISPR干扰实验(CRISPRi)对RNA-s

期刊

rs6858698CRISPRRNA-SEQ慢性淋巴细胞白血病rs6858698CRISPRRNA-seqchronic lymphocytic leu

健康的心脏保护老化的大脑

据美国WebMD医学新闻网（2016-03-10）报道，最新研究增加许多证据显示，保持心脏健康也有助于你的心智保持敏锐。在这篇研究中，符合超过7种心脏健康生活目标的老年人，在研究开始时思考

期刊

心脏保护心脏健康大脑老化医学新闻健康生活思考速度老年人

试论组织人事干部应具备的基本素质

<正> 在铁路提出跨越式发展的新形势下,将组织人事干部的素质、作风建设问题提到了十分重要的位置,组工干部素质的高低,不仅关系到干部的选拔,更重要的是关系到铁路能否实现

期刊

组工干部组织人事干部基本素质

保持忙碌会使头脑敏锐

据美国WebMD医学新闻网（2016-05-18）报道，虽然人们在事情太多时会抱怨太忙，但一项研究指出，工作繁忙可能对大脑真的有益。