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目的
分离培养结直肠癌相关成纤维细胞(CAF)，分析其与正常成纤维细胞(NF)的特征差异。
方法取新鲜结直肠癌及对应的正常结肠组织标本，采用组织块培养法分离培养CAF和NF，光镜、Western blot和免疫荧光技术鉴定所分离的细胞，荧光定量聚合酶链反应(qPCR)、免疫荧光技术、电镜观察和流式细胞术分析成纤维细胞的活化和生长特征。
结果组织块培养法成功分离CAF和NF，形态上NF为长梭形，呈束状、编织状、旋涡状排列生长，CAF呈胖梭形、星形或多边形，散在分布、排列无规则，胞质中可见较明显的肌动蛋白骨架；免疫表型上，二者均表达纤维连接蛋白，不表达上皮细胞钙黏蛋白、CD31和钙结合蛋白(caldesmon)。qPCR结果显示，CAF成纤维细胞活化蛋白mRNA表达高于NF，而成纤维细胞特异蛋白1 mRNA表达则低于NF。Western blot结果显示NF和CAF平滑肌肌动蛋白α(α–SMA)表达量差异无统计学意义(P>0.05)，免疫荧光显微镜观察显示CAF胞质中α–SMA呈束状、平行、规则地沿细胞长轴排列，NF中α–SMA则无此特征。电镜显示CAF胞质中可见密集、排列规则的肌丝，而NF则无。流式细胞术检测显示CAF中S期和G2期细胞比例明显低于NF，qPCR结果显示CAF相比NF转化生长因子β1、基质源性因子和血小板源性生长因子(PDGF)D mRNA表达下降，PDGFC mRNA表达升高，表明CAF相比NF增殖下降，细胞因子分泌存在差异。
结论CAF与NF在形态、活化特征及部分细胞因子分泌方面存在较大差异，CAF相比NF生长增殖能力下降。