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目的 比较大肠癌肿瘤相关成纤维细胞(CCAFs)的不同原代培养方法,筛选最佳培 养条件.方法 取新鲜直肠癌标本,以高浓度双抗低温处理后进行原代培养；12 d细胞计数法比较酶消化法与组织块植入法的CCAFs培养效率；利用6d贴壁率及12d爬出细胞数法比较不同组织块大小(1、8 mm3)、培养基种类(1640、DMEM、F12)、培养瓶材质(玻璃瓶、塑料瓶)与血清浓度(10％、20％)的培养效率；所获CCAFs行免疫荧光鉴定并绘制生长曲线；以SPSS 18.0软件进行统计学分析.结果 组织块植入法优于酶消化法,12d细胞计数分别为(9.75 ±0.91) ×104个与(1.83±1.22) ×104个(f=13.733,P＜0.01)；12 d细胞计数法提示高血清浓度(t=-3.549,P＜0.01),较大组织块(t=-1.115,P＜0.05)可增加细胞培养效率；与F12和DMEM比较,1640培养基具有更高细胞培养效率和性价比,其回归方程为:Y=10.687 50-3.965 28X22-2.006 94X3+1.03472X4；培养瓶材质不影响细胞数量(t=-0.116,P＞0.05)；6 d细胞爬H出率与培养瓶和培养基有关,回归方程为:Y =0.813 67 +0.20 478X1-0.333 12X22;原代培养的CCAFs表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及波形蛋白(Vimentin).结论 高浓度双抗低温处理组织标本,以含高浓度胎牛血清的1640培养基,采用大组织块植入法是CCAFs原代培养的优化方法,获得的CCAFs具有典型肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)特征。